代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是代谢综合征的肝脏表现，可能发展为更为严重的肝病，如代谢功能障碍相关脂肪性肝炎、肝纤维化甚至是肝细胞癌（HCC）。目前，代谢功能障碍相关脂肪性肝炎已经成为肝细胞癌的主要原因，但是代谢功能障碍相关脂肪性肝病相关的肝细胞癌（MASLD-HCC）的分子机制仍不明确。
免疫检查点阻断（ICB）是增强T细胞介导的抗肿瘤免疫力治疗癌症的方法，然而，研究表明，MASLD-HCC对ICB治疗具有抗性，甚至可能因为ICB治疗而加重。因此，需要确定形成MASLD-HCC独特肿瘤免疫微环境的因素，从而改善其对ICB治疗的反应。跨膜6超家族成员2（TM6SF2）是一种脂质代谢调节因子，其遗传变异与肝脂肪变性相关。2024年12月，香港中文大学于君和张翔团队在著名期刊《Gut》上发表文章“Hepatic TM6SF2 activates antitumour immunity to suppress metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease-related hepatocellular carcinoma and boosts immunotherapy”，研究发现肝脏TM6SF2可以激活抗肿瘤免疫，抑制代谢功能障碍相关脂肪性肝病相关的肝细胞癌并增强抗PD-1免疫疗法。
研究者发现在MASLD-HCC肿瘤组织中TM6SF2的表达较正常组织下调，为了研究TM6SF2在MASLD-HCC中的作用，研究者建立了肝细胞特异性TM6SF2敲除的小鼠，通过饮食诱导小鼠MASLD-HCC模型。蛋白印迹实验证实了小鼠的TM6SF2基因被敲除。随后，研究者在TM6SF2敲除小鼠中建立了二乙基亚硝胺（DEN）加HFHC饮食诱导的MASLD-HCC小鼠模型。与野生型（WT）同窝出生的小鼠相比，TM6SF2敲除小鼠中的血清AFP、GP 73、OPN和ALT水平，肿瘤数量、肿瘤直径和Ki-67阳性细胞显著增加。这些数据表明肝细胞中的TM6SF2缺陷促进饮食诱导的小鼠MASLD-HCC形成。此外，研究者还将不同HCC细胞系（Hepa1-6-Luc和RIL-175）植入小鼠中建立多种原位MASLD-HCC模型，再次证实了TM6SF2缺陷具有促进MASLD-HCC的作用。图1.肝细胞特异性TM6SF2敲除加重小鼠MASLD-HCC接下来，研究者对TM6SF2敲除小鼠和WT小鼠的肿瘤组织进行RNA测序以探究TM6SF2缺陷诱导MASLD-HCC的机制。基因富集分析表明，免疫相关途径是TM6SF2敲除诱导的肝癌肿瘤中最富集的途径，表明肝脏TM6SF2缺陷可能重塑MASLD-HCC中的肿瘤免疫微环境。研究者于是分析了原位或转基因小鼠肿瘤组织中的免疫细胞群，携带TM6SF2敲除的Hepa1-6或RIL 175同种异体移植物的小鼠抗肿瘤免疫力受损，CD8+T细胞，特别是IFN-γ+CD8+细胞毒性T细胞显著减少，而TM6SF2过表达则促进了CD8+T细胞和细胞毒性CD8+T细胞活化。此外，研究者观察到人原发性MASLD-HCC肿瘤组织中TM6SF2与CD8+T细胞浸润之间成正相关性，表明TM6SF2也调节人中的抗肿瘤应答。总之，这些发现表明TM6SF2缺陷通过损害CD8+T细胞功能以促进MASLD-HCC肿瘤发生。随后，研究者在具有TM6SF2过表达的Hepa1-6-Luc肿瘤的原位MASLD-HCC小鼠中使用抗CD 8抗体消除了CD 8+T细胞，结果表明施用抗CD 8抗体消除了TM6SF2的肿瘤抑制作用，肿瘤重量显著增加。此外，流式细胞术分析还揭示了抗CD 8抗体处理的小鼠血浆和肿瘤中的CD 8+T细胞的消耗。因此，肝脏TM6SF2通过增强细胞毒性CD8+T细胞的抗肿瘤应答来抑制MASLD-HCC。图2.TM6SF2通过增强细胞毒性CD8+T细胞应答抑制MASLD-HCC进一步探索TM6SF2缺陷损害MASLD-HCC中细胞毒性CD8+T细胞的机制。研究者检查了人MASLD-HCC细胞系的培养上清液中分泌的不同细胞因子的水平，结果表明，TM6SF2基因敲除的HKCI 10细胞的上清液中IL-6明显上调，TM6SF2敲除的HKCI 10细胞以及小鼠肿瘤组织中IL-6的mRNA和蛋白质表达也显著升高，在TM6SF2过表达的细胞中IL-6的表达则相反，表明肝细胞TM6SF2可能通过抑制IL-6分泌来增强细胞毒性T细胞功能并促进CD8+T细胞增殖。托珠单抗是IL-6的竞争性抑制剂，用托珠单抗处理的HKCI 10细胞的条件培养基显著消除了由TM6SF2敲除诱导的CD8+T细胞和IFN-γ+CD8+T细胞的减少，动物实验的结果与其一致，抗IL-6抗体的施用显著逆转了TM6SF2敲除的肿瘤促进作用。此外，流式细胞术分析表明抗IL-6处理的小鼠中增殖的CD8+T细胞增加，细胞毒性功能恢复。因此，TM6SF2通过IL-6调节细胞毒性T细胞功能。图3.TM6SF2通过IL-6调节细胞毒性T细胞功能研究者在AAV8-TM6SF2小鼠中进行了下拉测定和质谱分析，鉴定出NF-κB亚基β（IKKβ）的抑制剂为TM6SF2的潜在相互作用伴侣，并且通过抗IKKβ和抗TM6SF2-flag的免疫共沉淀反应验证了IKKβ和TM6SF2的相互作用。RNA测序发现TM6SF2️敲除小鼠肿瘤中的NF-κB信号通路显著上调。此外，TM6SF2敲除的HKCI 10细胞和肝组织中的磷酸-IKKα/β、磷酸-NF-κB p65、磷酸-NF-κB抑制剂α（IκB-α）和IκB-α的蛋白表达增加，TM6SF2过表达的HKCI 2细胞中NF-κB蛋白表达下调。NF-κB可激活IL-6的转录，使用NF-κB的直接抑制剂TPCA-1可使TM6SF2敲除诱导的IL-6表达增加无效。而且，TPCA-1对NF-κB的抑制也逆转了由TM6SF2敲除引起的IFN-γ+CD8+T细胞减少和CD8+T细胞增殖抑制。这些结果表明NF-κB-IL-6轴参与了TM6SF2介导的MASLD-HCC的免疫调节。研究者通过腺病毒引入TM6SF2进一步探讨TM6SF2激活是否可以提高MASLD-HCC的ICB治疗效果。结果表明，抗PD-1单一疗法未能抑制原位MASLD-HCC小鼠中的肿瘤生长，腺病毒引入TM6SF2恢复了抗PD-1的肿瘤抑制作用，而且在接受AAV8-TM6SF2和抗PD-1组合处理的Hepa1-6同种异体移植物中，CD8+T细胞，特别是IFN-γ+ CD8+T细胞显著增加。此外，研究者发现AAV8-TM6SF2加抗PD-1和多激酶抑制剂乐伐替尼三联疗法的肿瘤抑制效果最好。上述实验结果表明TM6SF2可以提高抗PD-1和靶向治疗的效果。图4.TM6SF2恢复抗PD-1疗法对鼠MASLD-HCC的功效总之，本研究表明肝脏TM6SF2通过抑制NF-κB-IL-6轴激活抗肿瘤免疫，从而增强细胞毒性CD8+T细胞的功能，抑制MASLD-HCC的发展，并且TM6SF2可以作为一种新的治疗靶点，增强MASLD-HCC患者的抗PD-1免疫治疗效果，具有重要的临床价值。本文作者：CT
责任编辑：TJY
全文链接：
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39667906/
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