生物制品表征Q&A:基于SEC的分子大小变异分析用的什么色谱柱?

文摘   2024-10-07 12:00   北京  



01

ICP-MS微量元素检测中,校

正曲线中的比率,DL,BEC分

别指什么

在ICP-MS(电感耦合等离子体质谱)微量元素检测中,"比率"、"DL" 和 "BEC" 是几个重要的术语,下面是他们的名词解释:


1.比率(Ratio):

在ICP-MS分析中,比率通常指的是样品中某一特定元素信号与内标(internal standard)信号的比值。内标是一种加入到所有样品和标准溶液中的已知浓度的元素,用来校正样品制备或分析过程中可能发生的信号波动。通过使用比率,可以有效地减少样品间的差异,提高分析的准确性和重复性。


2. 检出限(Detection Limit, DL):

检出限指的是在特定的分析条件下,某一元素能够被检测到的最小浓度,通常定义为信号强度为背景噪声的三倍(3σ)。这是一个重要的参数,它决定了分析方法能够检测的最低浓度值。


3. 背景等效浓度(Background Equivalent Concentration, BEC):

背景等效浓度是指在无目标元素的情况下,由于仪器背景噪声等因素产生的信号所对应的“假设”元素浓度。BEC用于评估测量的准确性,即在不存在目标分析物的情况下,仪器读数可能表现为多少浓度的元素。



02

elastase可以单独用做肽

图吗?chymotrypsin

独一管做肽图还是和trypsin

一起呢?

Elastase通常不单独用于肽图分析,因为它的切割特异性不如trypsin等其它酶。Elastase主要切割丝氨酸和甘氨酸旁边的肽键,这可能会产生非常短的肽段,不利于后续的肽段鉴定。但在某些特定情况下,弹性蛋白酶可以作为一种选择,尤其是当研究的蛋白质样品中主要含有弹性蛋白或者弹性蛋白相关的蛋白质时。


Chymotrypsin可以单独使用进行肽图分析,尤其是在研究含有大量芳香族氨基酸(如苯丙氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等)的蛋白质时。同时,它也可以和Trypsin联合使用。Chymotrypsin和Trypsin具有不同的特异性,分别对不同类型的氨基酸具有高度的特异性。Trypsin主要在精氨酸和赖氨酸的C端酶解,而Chymotrypsin则在芳香族氨基酸(如苯丙氨酸、酪氨酸)的C端酶解。因此,它们的联合使用可以提高肽段的覆盖率和鉴定的复杂度,这种方法在处理结构复杂或者高度疏水性的蛋白时较为常见。



03

基于SEC的分子大小变异分析用

的什么色谱柱?

基于SEC的分子大小变异分析使用的是尺寸排阻色谱柱(Size Exclusion Chromatography,SEC),也称为凝胶渗透色谱柱(Gel Permeation Chromatography,GPC)。这种色谱柱通常填充了交联度高的多孔聚合物材料,根据填充物的不同具体可分为以下几个类型:


1.硅胶基质的色谱柱:

如Bio-Rad的Bio-Sil SEC柱。

这些柱子有不同的孔径,适用于不同大小范围的分子分离。


2.聚合物基质的色谱柱:

如TSKgel G3000SWxl(Tosoh Bioscience)。

这些柱子特别适用于生物大分子如蛋白质、核酸等的分离。


3.超高效体积排阻色谱(UHPLC SEC)柱:

如Waters的ACQUITY UPLC BEH SEC柱。

这些柱子能提供更高的分辨率和更快的分离速度,适合于更复杂样品的分析。




04

ADC合成后我跑了HIC出现了

一个峰能说明偶联成功了吗?

在抗体药物偶联物(ADC)的合成后使用亲水相互作用色谱(HIC)检测,并观察到一个新的峰,这确实可能表明偶联反应发生了,因为HIC可以帮助区分不同的亲水性或疏水性特性的物质。如果ADC中的药物与抗体成功偶联,其亲疏水性会发生变化,这通常会在HIC分析中表现为新的色谱峰。


然而,仅靠一个新峰的出现并不能确定偶联完全成功。为了验证ADC的偶联是否成功并确定偶联的程度和一致性,您可能需要进行以下几个步骤的额外分析:


1.质谱分析(MS):

用来确认新峰的分子量,与理论上的药物-抗体偶联物相比较,以确认偶联物的存在。


2.反应效率检测:

通过定量方法(如ELISA,荧光标记等)来评估ADC中药物与抗体的偶联率。


3.生物活性测试:

确保偶联后的ADC仍保持预期的生物活性。



相关服务


抗体偶联药物( ADCS )分析

生物制药分析

蛋白质肽谱图测定

蛋白质结构鉴定

翻译后修饰蛋白组分析

基于质谱的序列分析

蛋白分子量测定

非变性质谱分析(Native MS)



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