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本篇文献的主要目标是通过对哺乳动物细胞系进行工程化改造，操纵乳酸合成途径来减少细胞培养物中乳酸的形成，从而实现单克隆抗体的高产量。
在本研究中，我们对LDH-A 进行了基因靶向改变，以抑制乳酸脱氢酶（LDH）活性。使用的模型细胞是产生针对人纤连蛋白的 IgG 的杂交瘤细胞系 (CRL-1606)。使用带有neo基因盒的LDH-A基因DNA作为新引入的基因。鉴定出含有破坏的LDH-A 基因的杂交瘤细胞变体。
根据培养基颜色变化和培养基中乳酸浓度的精确测量，通过初步筛选鉴定出一个克隆，LDH-neo21。在高糖常规培养基中，LDH-neo21细胞的乳酸产量低于正常亲本杂交瘤细胞。尽管正常细胞在指数期乳酸迅速积累并最终达到19至22 mM，但LDH-neo21细胞在同一时间段仅产生12 mM乳酸。
测量了LDH-neo21 细胞和正常亲本细胞在细胞生长过程中不同阶段的乳酸脱氢酶活性。工程化细胞的LDH酶活性显著低于正常杂交瘤细胞，仅占正常亲本细胞总LDH活性的50%。
琼脂糖电泳和蛋白凝胶电泳均显示，工程化细胞的乳酸脱氢酶量和表达带均低于正常亲本细胞。这表明，乳酸脱氢酶活性的降低与酶量的减少直接相关，而不是与酶催化特性的变化相关。
LDH-neo21 细胞中乳酸形成的代谢减少显然对细胞生长、代谢和细胞形态有影响。
结果显示，在6天的分批培养中，LDH-neo21细胞的总细胞密度比正常亲本细胞增加了约30%。 LDH-neo21 的细胞活力也高于正常亲本细胞活力。不过，LDH-neo21细胞的生长速度略低于正常亲代细胞。
测量葡萄糖和谷氨酰胺的消耗以及氨的产生，结果显示，工程化细胞的葡萄糖消耗比正常亲本细胞低25%。两种细胞的谷氨酰胺消耗量相似。LDH-neo21 细胞产生的氨略高于正常亲本细胞。
为了精确评估变异细胞的蛋白质产生，我们对单克隆抗体进行了 ELISA 测定。与分批培养的正常亲本细胞相比，LDH-neo21细胞的抗体产量在6天内增加了2.6倍以上。
使用LDH-neo21细胞的染色体DNA作为模板，通过PCR证实了杂交瘤细胞基因组中LDH-A基因的破坏。PCR结果表明LDH-neo21细胞的基因组DNA中存在neo基因盒序列，而对照杂交瘤细胞的染色体DNA中不存在neo基因盒序列。
结果，在LDH-neo21 DNA的反应中扩增出1.3-kb的PCR片段，而对照中不存在该片段与对照细胞的基因组 DNA 反应。 1.3kb的PCR片段包含neo基因盒的编码区序列、多聚腺苷酸化信号序列以及neo基因盒插入位点附近的LDH-A序列，表明neo基因稳定插入到LDH-A中。
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