随着药物上市，集采压力的增大，降本增效也被提上日程。而强化工艺是帮助企业达成降本增效目的的一种有效方式。企业可以在生物工艺的上下游工艺中布局强化工艺，但是目前强化工艺涉及的种类繁多，让人无从下手。本文中，介绍的一种强化工艺的方法，可以让企业快速上手，接触并体验强化工艺带来的便利。
种子扩增是细胞培养工艺的起点，这使得一个可靠且有效的种子扩增工艺显得尤为重要。传统的基于批生产模式的种子扩增，一般以1：5的比例进行接种。随着灌流模式的应用，我们可以轻松获得更高的细胞密度。这些高密度的细胞可以用于①支持高细胞密度（HCD）细胞库的产生，可以直接在摇摆式生物反应器中解冻，从而避免在摇瓶中进行细胞扩种以及相关的开放处理，②减少N-1罐子的数量/体积，③进行高密度Fed-batch（HIFB）培养。这样，简化了多级种子扩增步骤，且细胞在N罐中的培养时间大大减少。不仅可以节省实验人员的时间成本，同时可以大大降低N罐之前的硬件和耗材的成本。
实验材料和方法：
细胞株：CHO-DG44（Sartorius Stedim Cellca）
反应器：Biostat® RM
CSPR: 50 pL/cell/ day
VVD: depend on cell density
Temp:36.8 °C, pH 7.1 and DO 60 %, 10° angle, Rocks increased for DO
Goal: Reach 100E6 cells/mL in less than 7 days.
实验结果及讨论：
✪ 在Biostat® RM 2L 和10L规模进行N-1种子扩增，细胞密度在7天内可达100E6cells/mL，且细胞活率>90%。
✪ 取Day6/7的细胞(cell bank)接种至摇瓶中进行培养，细胞生长曲线与STR的曲线一致。
✪ 在5L玻璃罐中进行高密度Fed-batch（HIFB），与传统的Fed-batch相比，节省了42%的培养时间，且最终的titer接近。
结论
✔ Biostat® RM系统可以支持N-1和N阶段的高密度细胞培养，尤其是高密度细胞建库和种子扩增。
✔ 种子扩增阶段使用强化工艺，支持企业通过省略不必要的步骤来缩短种子扩增的步骤和时间，或者通过增加接种密度来减少生产过程的持续时间，以实现降本增效的目的。
Reference：
[1] Wittmann, C., Lia, J. C., Lee, S. Y., Nielsen, J., Stephanopoulos, G., Industrial Biotechnology: Products and Processes, Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KgaA, 2017
[2] Cost Effective 2D Rocking Motion Bioreactors with Internal Filters are Compatible with High Cell Density Perfusion Cultures (up to 170 Million Cells per mL), and Offer Significant Advantages for Seed Train Handling
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