快速转膜液
科研新突破
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在上期中,Coolaber推出的SDS-PAGE快速电泳液将蛋白电泳的时间从原来的1.5小时缩短到30分钟(详见推文:Western Blot快速实验系列解决方案(一)——快速电泳液)不过这只是Western Blot慢慢长征第一步。
接下来,小伙伴们还在为传统Western Blot中的冰浴转膜步骤头疼吗?在本期中,小酷继续为大家带来新惊喜——Western免冰浴快速转膜液(PM5072 / SL13243)!让转膜同样变得简单且快速~
前言
通过电泳转印技术的转膜方式主要有两种:湿转和半干转。半干转耗时短,但是更适合小分子蛋白的转印,而湿转蛋白分子量范围较宽,在Western Blot实验中,常用的是湿转。
传统的湿转转膜液配方有以下几种:
(1)Towbin缓冲液:(25mM Tris,192mM Glycine,20%甲醇,pH 8.3)是最普遍使用的转膜液配方;
(2)CAPS缓冲液 (10mM CAPS,10%甲醇,pH 11)更适用于高分子蛋白质(>150 kDa)的转印或者是Towbin 缓冲液的甘氨酸组分可能干扰下游蛋白质测序应用的情况;
(3)Dunn Carbonate缓冲液:(10mM NaHCO3,3mM Na2CO3,20%甲醇,pH 9.9)更适用于碱性蛋白质的转移。
尽管这些传统的转膜液具有广泛的适用性,但是其蛋白质转移的速度和效率都明显较低,蛋白质转印过程一般需要耗费1‑3 h,且需要通过提前预冷转膜液和在转膜过程中大量使用冰浴来减少转膜过程中巨大的发热量,这些都严重降低了科研人员的实验效率,增加了时间成本和劳动负荷。
因此,建立具有快速的转印速度,而且适用于各种不同大小分子量的蛋白转印需要,同时还要尽可能杜绝有毒试剂使用的新型快速转膜液就显得十分必要。
Coolaber全新推出的Western免冰浴快速转膜液是一款适用于湿转法的快速转膜缓冲液,采用全新的缓冲剂配方,能够在较短时间内确保蛋白质的稳定、高效的转移,大幅度缩短传统转膜所需的时间。配制过程中,用无水乙醇替代甲醇,安全无毒,转膜全程产热量低,无需冰浴。
产品特点
🌻🌻省时省力,效率翻倍
Western免冰浴快速转膜液在450mA下,平均35 min即可实现高效、均匀的蛋白转移,大大缩短实验时间,同时保证了蛋白的质量与高水准。
以下为转印一块1.0 mm的凝胶的推荐转膜时间:
注:凝胶厚度越大,转膜效率越低,对于厚度1.5 mm的凝胶,可将转膜时间相应延长5-10 min。
🌻🌻兼容广泛,结果可靠
无论是各种浓度的凝胶、各种大小的目的蛋白,还是PVDF膜或者NC膜,这款转膜液都能完美适配,保证实验结果的稳定性和重复性。
图1 CoolaberWestern免冰浴快速转膜液在转膜前后的对比效果图
注:上图为该转膜液在0.45 mm PVDF膜上的转印效果,下图为该转膜液在0.45 mm NC膜上的转印效果;在450mA恒流的条件下,35 min可将150 kDa以下的蛋白完全转印,150 ~ 250 kDa的蛋白条带有部分残留,将转印时间增加至45 min左右即可完全转印。
实验凝胶使用Coolaber10%一步法免染PAGE凝胶 (SK62110),凝胶厚度为1.0 mm。蛋白分子量标准分别为10-180 kDa预染蛋白Marker (DM2616)和10-250 kDa双色预染蛋白Marker (DM2618),上样量分别为5 mL、7.5 mL、5 mL。PVDF膜为0.45 mm PVDF膜 (45PVDF6685),NC膜为0.45 mm NC膜(HATF00010)。使用的电泳仪型号为Tanon EPS 600。实际转膜效果会因实验条件、仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
🌻🌻全新配方,免除冰浴
Western免冰浴快速转膜液采用全新的配方设计,与传统普通转膜液相比,产热大幅降低。与Y公司同类型免冰浴快速转膜液相比,转膜过程产热少,无需繁琐的冰浴过程。
图2 转膜液在转膜前后的温度变化情况
🌻🌻环保安全,绿色科研
这款转膜液在保证性能的同时,也注重环保与安全,无毒无害,配置过程可用乙醇替代甲醇,实验千万条,健康第一条!
快来体验免冰浴快速转膜液吧!升级实验工具箱,开启科研新篇章!
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