细菌的“梦想家园”
LB细菌培养基
前言
LB来源于溶菌肉汤(Lysogeny broth),是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,其主要成分包括胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。胰蛋白胨为细菌的生长提供氮源,酵母提取物提供维生素和微量元素,氯化钠则在培养基中负责维持渗透压,并提供无机盐。分子实验中一般用LB培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,以提取带有外源基因的质粒,亦可以用来大量表达和提取外源蛋白。
Coolaber公司生产的LB培养基干粉产品是一种预先混合好的粉末状培养基,加水即可迅速配制成 LB 液体培养基,并可根据后续实验的需要加入琼脂粉和筛选抗生素,使用方便快捷。
产品简介
成分组成:
使用方法:
1. 称取25 g本品,加入去离子水搅拌至完全溶解,定容至1 L,推荐使用115℃灭菌20 min。
2. 如需加入抗生素,培养基需冷却至55℃左右(手可触摸瓶壁),加入抗生素,并置放于4℃冰箱保存,可保存1个月。
产品对比
外观:
国产LB干粉配制的液体培养基与进口LB相比,颜色略偏黄,二者pH均为5.9左右,灭菌后均为pH 7.0左右,且无明显颜色变化,(参考图2、图3)。
细菌液体培养:
以大肠杆菌DH5α和农杆菌GV3101为示例观察细菌培养的混浊度情况,国产LB和进口LB培养基细菌的生长情况基本相当(参考图4)。
进一步以大肠杆菌DH5α和农杆菌GV3101为示例做细菌培养测试,绘制细菌生长曲线。国产LB和进口LB培养基在细菌的生长情况方面无显著差异(参考图5、图6)。
细菌平板培养:
将适量琼脂粉加入LB液体培养基,加热融化即可制成平板。国产LB琼脂干粉配制的平板与进口LB相比,颜色略黄(参考图7)。
分别将等量Kan和Amp抗性的连接产物转化等量大肠杆菌 DH5α,使用等量的国产和进口LB进行复苏培养,涂布等量菌液于 LB 平板。国产 LB 与进口 LB 细菌的生长菌落数量相当,其中国产 LB 卡那抗性菌单菌落数均略高于进口 LB,氨苄抗性菌两者无明显差异,结果如图 8⁓11 所示。
大肠原核蛋白表达:
分别使用国产和进口的LB液体培养基诱导蛋白表达,并跑胶检测蛋白表达量(参考图12),国产LB培养基每百毫升菌液约可提取总蛋白80 μg,进口LB培养基每百毫升菌液约可提取总蛋白100 μg(参考图13)。
END