蛋白上样缓冲液的蜕变
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在做蛋白变性/上样过程中,我们经常被传统蛋白上样缓冲液(Loading buffer)挥发出的刺激性气味熏的头昏脑胀,破坏一天的好心情。
那么到底是什么物质产生令人不愉快的气味呢?让我们来一探究竟:
背景
介绍
Loading buffer的组成?
1. Tris-HCl——提供缓冲环境,维持pH值;
2. 溴酚蓝——电泳过程中指示蛋白电泳的进度;
3. 甘油——增加上样液的密度,使蛋白沉到点样孔底部,易于上样。
4. DTT/β-巯基乙醇——还原剂,对二硫键进行还原,充分变性蛋白。
产品
介绍
产品特点&优势
创新配方,蛋白变性后更稳定
新型变性剂,快速融化,上样不粘稠
沉降性好,加样快速沉降,避免样品污染
新型还原剂,还原能力更强更持久
无刺激气体挥发,更健康
产品使用效果
使用说明:
1. 将5×蛋白上样缓冲液(无气味)与蛋白样品按照1:4的比例混匀。
2. 将蛋白样品置于95°C金属浴或水浴中加热5-8 min。
3. 蛋白样品充分变性后冷却至室温,以小于3000 rpm的条件离心30 s。
4. 用微量进样器取适量上清,直接加入PAGE凝胶加样孔内。
5. 进行常规电泳,通常染料到达距离凝胶底端0.5-1 cm处即可停止电泳。
注意事项:
1. 5×蛋白上样缓冲液必须完全溶解后使用,加样前在室温或37-40°C数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀。
2. 温度过高(如100°C)或时间过长(如超过15 min),有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
3. 本品仅限专业人员使用,不得用于临床诊断或治疗。
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