蛋白上样缓冲液的蜕变

文摘   2024-11-08 17:14   北京  


蛋白上样缓冲液的蜕变

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在做蛋白变性/上样过程中,我们经常被传统蛋白上样缓冲液(Loading buffer)挥发出的刺激性气味熏的头昏脑胀,破坏一天的好心情。


那么到底是什么物质产生令人不愉快的气味呢?让我们来一探究竟:

背景

介绍

Loading buffer的组成?

1. Tris-HCl——提供缓冲环境,维持pH值;

2. 溴酚蓝——电泳过程中指示蛋白电泳的进度;

3. 甘油——增加上样液的密度,使蛋白沉到点样孔底部,易于上样。

4. DTT/β-巯基乙醇——还原剂,对二硫键进行还原,充分变性蛋白。

 

DTT有刺激性气味,吸入、误食会对身体健康造成危害。β-巯基乙醇的毒性更强,吸入、摄入或经皮肤吸收后可能会导致神经系统毒性、肾功能损害等,影响身体健康。
 
为了避免这种毒性,coolaber研发的5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(无气味)/非变性PAGE蛋白上样缓冲液(无气味)是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的蛋白上样缓冲液,分别用于变性或非变性蛋白样品的上样操作无气味、水溶性更稳定还原剂替代了刺激性气味的DTTβ-巯基乙醇在正常使用或加热时都不会有异味,蛋白上样操作更加安全健康。


产品

介绍



产品特点&优势

  • 创新配方,蛋白变性后更稳定

  • 新型变性剂,快速融化,上样不粘稠

  • 沉降性好,加样快速沉降,避免样品污染

  • 新型还原剂,还原能力更强更持久

  • 无刺激气体挥发,更健康



产品使用效果




使用说明:

1. 蛋白上样缓冲液(无气味)与蛋白样品按照1:4的比例混匀。

2. 将蛋白样品置于95°C金属浴或水浴中加热5-8 min

3蛋白样品充分变性后冷却至室温,以小于3000 rpm的条件离心30 s

4. 微量进样器取适量上清,直接加入PAGE凝胶加样孔内。

5. 进行常规电泳,通常染料到达距离凝胶底端0.5-1 cm处即可停止电泳。



注意事项:

1. 蛋白上样缓冲液必须完全溶解后使用,加样前在室温或37-40°C数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀。

2. 温度过高100°C或时间过长如超过15 min,有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。

3. 本品仅限专业人员使用,不得用于临床诊断或治疗。


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