荧光素报告基因检测蛋白的转录活性
转录因子(transcription factor, TF)指可直接或间接与基因启动子区域中顺式作用元件发生特异性相互作用，对基因转录进行调控的蛋白质。转录因子根据其对下游功能的不同可以分为转录激活因子和转录抑制因子。当研究转录因子的调控功能时，往往需要知道研究的转录因子是否具有转录激活或抑制活性。目前常见的研究转录因子转录活性的方法为报告基因检测系统。
Tips：报告基因是一类不存在于受体细胞且易于筛选检测的基因，在基因工程领域，常用的报告基因有抗生素抗性基因、营养缺陷型基因、α-半乳糖苷酶基因（MEL1）、β-半乳糖苷酶基因（lacZ）、荧光素酶基因（FLUC、RLUC）、荧光蛋白基因（GFP、YFP）等。
Coolaber已经推出酵母转录活性检测系统相关试剂盒（MH101/MH102），参见往期推文：这里有一份转录因子活性检测新方案！
当当当! 此次我们带来了在植物系统内检测转录因子转录活性的新品：植物转录活性检测试剂盒（MH103）。
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实验原理
植物转录活性检测试剂盒基于双荧光素酶报告基因检测原理，结合植物原生质体瞬时转化法，可以应用到转录因子转录活性的检测分析。在同一细胞内同时表达萤火虫荧光素酶（FLuc）和海肾荧光素酶（RLuc），两者分别可以催化荧光素和腔肠素发生氧化反应并产生不同波长的荧光。通过酶标仪可以检测到两种荧光信号强度。RLuc作为内参基因可以减少细胞活性和转染效率等外在因素产生的实验误差。GAL4 BD为本底表达，GAL4 BD-VP16可以作为转录激活活性的阳性对照。将待检测的转录因子与GAL4 BD或GAL4 BD-VP16融合表达，BD结合5×GAL4-TATA转录调控元件进而调控FLuc的表达。通过FLuc与RLuc的比值，即可判断该转录因子具有转录激活活性或转录抑制活性。
part.2
产品组分
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产品特点
1. 本试剂盒提供了植物转录活性检测用到的3个主要质粒，包含1个Reporter质粒、2个Effector质粒。
2. 提供了在植物原生质体中检测转录因子转录活性的方案。检测系统灵敏高效，应用范围广。
3. 优化了转录活性测定的经典实验体系。内参基因RLUC与报告基因FLUC整合于同一Reporter质粒中，从3个质粒转化体系（Reporter质粒、Effector质粒、内参质粒）优化为2个质粒转化体系（Reporter质粒、Effector质粒）。内参控制更准确，操作更简便。
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实验操作流程
Tips：详细操作步骤请参考文献或产品说明书。
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产品使用效果
采用植物转录活性检测试剂盒（Coolaber # MH103），在水稻原生质体（Coolaber # PPT111）中检测OsEIL1、OsJAZ9和OsTH1的转录活性。结果如图所示，GAL4 BD具有本底表达活性；阳性对照BD-VP16相对荧光素酶活性显著高于GAL4 BD；实验组BD-EIL1相对荧光素酶活性显著高于GAL4 BD，表明OsEIL1具有转录激活活性；BD-JAZ9和BD-TH1相对荧光素酶活性显著低于GAL4 BD，表明OsJAZ9，OsTH1具有转录抑制活性。
part.6
参考文献
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