快速电泳液
前言
Western Blot即蛋白质印迹法,作为蛋白质生物学领域中重要的技术之一,广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
在这项技术中,电泳是关键步骤,通过转移分离的蛋白质至膜上,以便后续的抗体检测。其中,Tris-Glycine体系是最常用的电泳缓冲体系之一。
传统的电泳缓冲液,电泳时的电压不能过高,一般不超过150V,电压过高会造成缓冲液发热,蛋白降解,而在150V电压条件下,10*8cm胶,电泳90分钟左右,才能将15-170kDa的蛋白全部分开,十分浪费时间。
现在,Coolaber推出新产品:快速电泳缓冲液预混干粉(货号:PM5063)。本产品相比传统的SDS-PAGE电泳液,可以大大加快电泳速度,缩短电泳时间。只需150V-200V恒压跑胶20-35min,即可完成SDS-PAGE (SDS变性聚丙烯酰胺凝胶)蛋白电泳,并获得蛋白条带非常清晰、平整的电泳效果。
产品特点
1. 快速省时:使用150V-200V恒压电泳,约20-35分钟即可有效分离不同分子量的蛋白质,提高电泳效率,同时电泳条带平整、清晰。
2. 条带清晰:具有非常优良的分离效果,电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利。
3. 性能稳定:在电泳过程中电泳液温度、pH等参数无明显变化,确保实验结果的准确性。
4. 操作简单:本产品为预混干粉,室温储藏,溶解性好,使用前用双蒸水溶解即可。
5. 可重复利用:回收后的电泳液可以作为外槽电泳液使用2~3次,降低实验成本。
产品使用效果
(1)电泳效果图
分别用Coolaber一步法免染PAGE凝胶快速制备试剂盒和经典SDS-PAGE凝胶制备试剂盒配制浓度为6%、10%、15%的蛋白胶,相比普通的电泳缓冲液,Coolaber研发的快速电泳缓冲液可以大大提升电泳速度,缩短电泳时间,电泳条带清晰平整,且不影响下游实验(图1)。
图1 SDS-PAGE快速电泳液用于各种浓度分离胶的电泳效果图。
注:图例为分别使用Coolaber的SDS-PAGE制胶试剂盒(SK6010)和一步法PAGE凝胶制备试剂盒(SK601/SK621)制作的各种浓度凝胶,在相同实验条件下快速电泳液与传统Tris-Gly电泳液的对比效果图。左侧的蛋白分子量标准为双色预染蛋白Marker(10-250 kD,DM2618);右侧的蛋白分子量标准为预染蛋白Marker(10-180 kD,DM2616)。快速电泳液可以在短时间内有效分离不同分子量的蛋白质,尤其是小分子量的蛋白质,且条带更加清晰锐利。
(2)电泳效果对比图
相同电泳条件下,Coolaber与其他公司电泳速度相当,电泳效果也没有明显差异。同时,Coolaber的快速电泳液不仅适用于经典方法制作的PAGE凝胶,也同样适用于一步法制作的PAGE凝胶以及预制胶,电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利(图2)。
图2 Coolaber快速电泳液与B-公司电泳液效果对比图
注:图例为分别使用Coolaber的SDS-PAGE制胶试剂盒(SK6010)、一步法PAGE凝胶制备试剂盒(SK601/SK621)、B公司生产的预制胶以及Y公司生产的一步法凝胶制作的各种凝胶比对。在相同实验条件下Coolaber快速电泳液与B公司电泳速度相当,电泳效果也没有明显差异。
左侧的蛋白分子量标准为双色预染蛋白Marker(10-250 kD,DM2618);右侧的蛋白分子量标准为预染蛋白Marker(10-180 kD,DM2616)。说明Coolaber快速电泳液适配于各种制胶体系下制作的凝胶。
(3)电泳液电流、温度变化检测图
在进行恒压电泳的过程中,一定程度的电泳液温度升高可以促使蛋白在凝胶中的移动速度加快,但是过高的温度会使蛋白更易降解。经过检测,Coolaber快速电泳液在使用过程中,温度和电流变化区间与传统电泳液和其他公司生产的电泳液相比均没有显著差异(图3)。
图3 Coolaber快速电泳液、B-公司快速电泳液和普通电泳液的电流、温度变化检测图
注:图例为不同浓度凝胶在相同实验条件下分别使用Coolaber快速电泳液、B-公司快速电泳液以及普通电泳液跑电泳的初始和结束时,电流、温度的变化情况。可以看出三者之间对比没有明显的变化。
温馨提示
1. 配制溶液前请确保所需器材洁净。
2. 本快速电泳液中含有SDS,适用于变性胶蛋白电泳。
3. 本品为预混干粉,配成工作液后,可室温放置两周,如4℃预冷则使用效果更佳。
4. 本品可适当重复使用2~3次左右,但随着使用次数的增加,电泳效果会有所下降。
5. 如果在电泳过程中出现电泳液温度升高(超过40℃)、电泳液浑浊、出现沉淀或颜色发生变化等情况,请及时更换电泳液。
6. 为防止泳道间相互粘连,请尽量将蛋白上样量控制在20 μL以内,如必须采用高上样量,请适当降低电泳电压。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题及解决方案
电泳过程中电泳液温度过高(超过40℃):
1.电泳槽的电极丝未用蒸馏水清洗干净。
解决建议:清洗电泳槽
2.电泳液使用次数过多或电泳液保存不当。
解决建议:更换电泳液
电泳液变色:
1.配制的电泳液放置时间过久或重复使用次数过多。
解决建议:更换电泳液
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