如何选择合适的表达感受态
一、分类介绍
“As we all know”
大肠杆菌（E.coli）是分子生物学研究过程中最常用的宿主细胞，广泛应用于基因克隆、蛋白表达等过程，其主要分为K-12衍生株和B衍生株两大类。K-12衍生出的商业菌株包括JM109、DH5α、和Top10等，多用于遗传工程中的基因克隆。B衍生株常用的为BL21菌株，与K-12衍生株相比，B衍生株缺少鞭毛基因、DNA胞嘧啶甲基转移酶和外膜蛋白酶OmpT (OmpT protease)，更适合生产重组蛋白。
“But”
但是现在琳琅满目的B衍生株，我们又该如何从中选择合适的感受态来表达蛋白呢？
“How？”
在选择之前我们先看看这些名称的含义是什么，又有什么功能呢？
“BL21”
Lon 和 OmpT蛋白酶缺陷，只表达大肠杆菌RNA聚合酶，适合依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的质粒载体，如pGEX、pMAL等。它主要适用于非毒性蛋白的表达，因为其不含T7 RNA聚合酶，所以不适用于T7启动子驱动的蛋白表达。
“(DE3)”
菌株基因组含有λ噬菌体DE3区的T7噬菌体RNA聚合酶编码序列。得益于此，可以让菌株高效表达含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)。适用于T7启动子和非T7启动子的质粒载体，如常见的pET、pGEX、pMAL系列。
“Rosetta”
Rosetta菌株由BL21菌株衍生而来，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA，提高外源基因尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。
“pLysS”
让菌株附带氯霉素抗性，因其含有表达T7溶菌酶的基因，表达出的T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖抑制大肠杆菌繁殖速率，还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
“gami2”
Origami2的缩写，含有突变的还原途径的两个硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于含有二硫键蛋白的正确折叠，增强蛋白的可溶性。含有链霉素，四环素抗性，为亮氨酸生长缺陷型菌株。
“Star”
菌株含有rne131突变（RNase E编码基因），该基因的突变会降低了內源RNase的积累，增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而提高异源蛋白的表达水平。
“(AI)”
该菌的araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶转录受到L-阿拉伯糖严格控制，培养基中添加葡萄糖可抑制araBAD启动子活性，添加L-阿拉伯糖则驱动T7 RNA聚合酶的转录进而诱导表达重组蛋白。因此，在BL21(AI)中这一基础表达可降低到极低水平，更适合于对细菌有毒性的重组蛋白表达。
“I believe that”
通过上面的介绍你们已经全部了解
“Consequence，I’m confident that a bright future is awaiting us because”
你们已经找到最适合自己实验合适的表达感受态。
“Finally, I have to conclude”
二、总结
没看够？
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