植物RNA提取宝典
在植物科学研究中，进行转录组测序、基因克隆、基因表达量分析等实验时，都需要先从各种植物样品中提取RNA。获得纯度高、完整性好的RNA，对后续实验至关重要。
如何正确地进行植物RNA提取？Coolaber为您提供了独家解决方案，快来一起看看吧！
卷一 RNA提取前准备
植物样品的特殊性
01
相比于动物组织细胞样品，用于提取RNA的植物样品会更加复杂多样，主要表现为：
1. 植物样品类型多样。植物的不同器官（根、茎、叶、花、果实、种子等），组织（种皮、果皮、胚芽、愈伤组织等），细胞（原生质体等）都可能作为RNA提取的样本。此外，不同发育时期或经过额外处理（生物或非生物胁迫等）的植物样品也经常被用于RNA提取。使得用于RNA提取的样品不是始终处于健康、新鲜、幼嫩的最佳状态。
2. 植物的细胞含有蛋白质、脂质，多糖，次生代谢物等多种代谢产物，且不同植物种类及组织部位，代谢产物的种类及含量大不相同。在RNA提取的裂解步骤中，RNA不可避免会与这些代谢物混合。这些代谢物在结构上与核酸相似，会发生共沉淀反应，从而降低了RNA提取的产量和质量。获得高质量RNA的难点就在于将RNA与这些代谢物进行分离。
3. 植物样品存在一些固有特征，比如含有高水平RNases（会降解RNA）、由于高含水量导致RNA浓度很低，纤维组织（如木质素）难以分解和移除等。
正确保存植物样品
02
1. 液氮速冻后于-80℃保存：采集的植物样本进行适当的清理灰尘，污垢等处理后，分解成方便后续研磨的小块，液氮速冻后于-80℃保存，千万不能解冻。
2. RNA样品保存液保存：如果不方便马上提取RNA，而又没有液氮或超低温冰箱保存样品时，可以使用RNA样品保存液（Coolaber # RE1031）保存部分植物样品。RNA样品保存液能够帮助你随时随地对用于RNA提取的植物样品进行保存和运输，无需低温条件。它能快速渗透到组织细胞内部，灭活组织中的RNase，避免RNA降解，延长样品保存时间。点击文末链接，了解产品详细信息。
选择合适的样品预处理方式
03
1. 对于新鲜的植物样本，可液氮速冻后，采用液氮研磨的方式（手动或研磨机研磨）将样品破碎成细粉，加入裂解液混匀后进行后续操作。如果没有液氮，也可将新鲜组织直接在裂解液中研磨。
2. 已经-80℃冻存的样本，不能化冻，直接用液氮研磨的方式处理样本。
预防RNA降解
04
由于RNA比DNA的化学性质更活泼，易于被RNA酶（RNase）切割。RNase从裂解的细胞中释放且存在于皮肤，器皿、操作台、仪器、浮尘上，很难被有效失活。RNase的污染往往容易造成实验失败（RNA被降解），所以在实验中我们要尽量避免RNase的污染。主要措施有：
1. 操作人员穿实验服、佩戴口罩、手套。
2. 使用固相RNase清除剂（Coolaber # RE1010）清除工作台及仪器表面的RNase污染。
3. 使用RNase-free的离心管与枪头。
4. 所有试剂应为新开封的或RNA专用的，不用于其它用途。配制试剂需用RNase-free水配制。
5. 电泳槽及制胶设备专用，电泳缓冲液应用RNase-free水配制。凝胶现制现用。
卷二 RNA提取 储存 使用
RNA提取的基本原理
05
RNA提取就是将细胞裂解，释放出RNA，并通过不同方式去除细胞碎片、多糖、脂质、色素、蛋白质、DNA等杂质，最终获得高纯度RNA产物的过程。在植物细胞中，主要有三种类型的RNA：信使RNA（mRNA）、转运RNA（tRNA）和核糖体RNA（rRNA）三大类。没有特殊说明的情况下，总RNA提取指的是共提取以上三种类型RNA。
选择合适的RNA提取试剂
06
对于简单样本（多糖多酚含量低，次级代谢简单），可以选择基于Trizol原理的总RNA提取试剂（RE600，直接沉淀纯化）或植物RNA快速提取试剂盒（RE651，柱式纯化）。Coolaber新升级的这两款产品具有极强的裂解能力；最大程度抑制RNase的活性，保证RNA完整性；先进的缓冲体系，极少的DNA残留。例如：水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、大豆叶片、番茄叶片、烟草叶片、拟南芥叶片、马铃薯叶片、番薯叶片、桂花叶片等都可以使用这两款产品提取RNA，植物RNA快速提取试剂盒采用柱式纯化，纯度更高。点击文末链接，了解产品详细信息。
产品使用示例：
使用植物RNA快速提取试剂盒（Coolaber #RE651）提取不同植物样本总RNA。结果显示Coolaber #RE651可以兼容多种植物样本，RNA典型的28S和18S条带完整、清晰、明亮，并且28S的亮度在18S条带的约两倍以上，表明提取到的RNA完整性好。提取到的RNA无基因组DNA残留，纯度高。
注：起始样品量：约50 mg植物新鲜叶片；洗脱体积：水稻叶片、玉米叶片、烟草叶片50μL洗脱，其余100 μL洗脱；电泳上样量：2 μL；
M：D2000 plus DNA Marker（Coolaber #DM1021）。
一些代谢产物丰富，多糖多酚含量高的复杂样本，如马铃薯块茎、甘薯、种子、植物果实、树木类植物、中草药等，使用Trizol法往往不能提取出来。这个时候可以使用针对多糖多酚类植物专门设计的多糖多酚植物RNA提取试剂盒（RE661）。可以高效快速提取复杂植物样本RNA。
此外，对于从植物原生质体中提取RNA，可以使用Viszol LS 总RNA提取试剂（RE700）。Viszol LS是一款专门用于提取液体样本RNA的浓缩试剂，适用于收集的原生质体中含有较多水分的使用场景。点击文末链接，了解产品详细信息。
RNA的储存与使用
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提取好的RNA应立即置于冰上，可以直接用于下游实验。长期储存需将RNA分装后保存于-80℃，尽量避免反复冻融。使用RNA时，应将RNA置于冰上化冻，接触RNA的离心管及枪头应为RNase-free的，使用完毕后应及时将RNA放回-80℃储存。
往/期/回/顾
