膜系统酵母双杂交
核系统酵母双杂交作为一种重要的分子互作实验，在检测核蛋白之间的相互作用中发挥了重要作用。其原理是将待研究的两个蛋白质分别与GAL4的DNA结合结构域（BD）和转录激活域（AD）融合，从表达产物分析两种蛋白质的相互作用，但其过程必须发生在细胞核中。
然而，膜相关蛋白约占细胞总蛋白质的1/3，它们大都参与了细胞的诸多生理、病理过程和药物反应机理。研究膜蛋白的相互作用对于揭示细胞的生命活动规律及寻找药物作用靶标都有重要的意义。由于膜蛋白本身的特性及其难以进入核内等原因，经典的核系统酵母双杂交技术并不适用于检测膜蛋白间的相互作用。
膜系统酵母双杂交原理
基于分裂泛素的膜系统酵母双杂交是经典用于膜蛋白-膜蛋白或膜蛋白-可溶性蛋白之间的互作检测的重要系统。
泛素是一种含76个氨基酸的保守蛋白，它经常作为降解信号连接在蛋白质的N端。泛素能被其特异性的蛋白酶(ubiquitin-specific proteases, UBPs)识别并从所连接的蛋白上切割下来，切割位点总是位于泛素蛋白的C端。在酵母细胞中，泛素可以分成两部分单独表达，即其N端部分(NubI, 第1~34位氨基酸)和C端部分(Cub, 第35~76位氨基酸)，后者融合有能启动核内报告基因表达的LexA-VP16蛋白。将诱饵蛋白和猎物蛋白分别与Cub和NubG两个结构域融合，并在膜上正常表达。当诱饵蛋白和猎物蛋白存在相互作用时，由于蛋白互作使NubG和Cub在空间上接近，从而形成一个完整的泛素分子，导致细胞质侧的转录激活因子LexA-VP16被UBPs切割，游离的LexA-VP16进入细胞核，激活His3、Ade2与LacZ表达，可用相应的缺陷培养基和β-半乳糖苷酶显色试剂盒筛选有相互作用的蛋白。
图1 膜系统酵母双杂交体系原理
膜系统酵母双杂交体系的优点
(1)在体内原位检测蛋白-蛋白间的相互作用而无需核定位信号。
(2)使用小的泛素结构域(NubG/Cub)使得相互作用蛋白质之间的空间位阻最小化。
(3)可以用来研究两个膜蛋白的相互作用和一个膜蛋白与一个胞质蛋白的相互作用。
产品内容
YH3021 NMY51膜系统酵母双杂互作验证试剂盒
产品简介
1、 本试剂盒提供三种诱饵质粒供君选择。
2、试剂盒除耗材外已包含实验所需所有材料，可用于10对双杂互作验证，省心省事。
3、 试剂盒内说明书内容全面，清晰明了，操作性强，提供了详细的操作步骤和实验中的注意事项，帮助您更简单快捷的完成实验。
诱饵载体的选择
注：若N端和C端都位于胞外或细胞器腔内，可截短使得C端位于胞内段，再选择相应的载体。
实验结果展示
图2 对照组实验验证结果
图3 互作验证结果示意图
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