快报｜基于荧光免疫层析法的γ-干扰素释放试验的应用性评价

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作者：曹雪芳、陈彦宵、辛赫男、杜江、冯博轩、何翼君、郭同磊、沈玲羽、邸元植、梁建国、李子涵、张彬、王大宽、刘自森、段伟焘、金奇、高磊 

第一作者及单位：曹雪芳，中国医学科学院/北京协和医学院病原生物学研究所；陈彦宵，郑州大学公共卫生学院

通信作者及单位：高磊，中国医学科学院/北京协和医学院病原生物学研究所

The performance of a new rapid interferon gamma release assay based on fluorescence immunochromatography for Mycobacterium tuberculosis infection testing in village doctors in China.

Cao X, Chen Y, Xin H, Du J, Feng B, He Y, Guo T, Shen L, Di Y, Liang J, Li Z, Zhang B, Wang D, Liu Z, Duan W, Jin Q, Gao L.Epidemiol Infect，2024 Nov 8;152: e155. 

doi: 10.1017/S0950268824001146.

PMID: 39512066 

结核病（TB）是严重危害人类健康的全球公共卫生问题，2022年全球约有1060万结核新发病例。据报道，全球约有1/4的人感染了结核分枝杆菌（MTB），其中有5%-10%会在一生中发展为活动性结核病。针对结核潜伏感染（LTBI）高危人群开展结核感染检测和预防性治疗是可以有效降低结核发病的有效手段。目前，结核感染检测缺乏金标准，WHO推荐的检测方法包括结核菌素皮肤试验（TST）、MTB特异抗原皮肤试验（TBST）和γ-干扰素释放试验（IGRA)。荧光免疫层析法（AIMTB Rapid Test Assay）是一种新型结核感染检测方法，它基于IGRA的原理，通过检测血液中记忆性淋巴细胞再次接触MTB特异抗原刺激时分泌的IFN-γ，来判定机体是否存在针对MTB的特异性T细胞反应。其显著优势在于不仅采用MTB特异性抗原，而且操作简便，样本的检测可以在大约20分钟内完成。然而，荧光免疫层析法尚未在我国人群进行广泛探索和验证。2017—2019年，我们团队开展的队列研究表明村医是结核感染的高风险人群。近几年，我国的结核病发病率呈现下降趋势，然而，村医人群的结核潜伏感染率的变化尚未报道。基于此，本研究目的是针对已建立的乡村医生队列开展IGRAs检测（QFT-Plus和荧光免疫层析法），在排除活动性结核病的基础上获得基层职业暴露人群的结核感染情况，并比较不同结核感染检测产品的一致性，获得适宜基层的结核感染检测技术应用建议，推动针对基层职业暴露人群的感染防控策略的形成。

      （一）研究对象

      在2023年8月24日至8月26日期间，采用AIMTB Rapid Test Assay和QFT Plus两种检测方法对中牟县所有登记在册的乡村医生进行MTB感染检测。纳入标准：在中牟县下属街道办、社区、乡镇、行政村、自然村从事医护工作；自愿签署知情同意书并配合完成研究内容。排除标准：既往结核病患者、结核病现患患者、妊娠或准备妊娠的妇女。

      （二）数据收集

      问卷信息：年龄、性别、教育水平、月收入、吸烟状况、饮酒状况、体重、身高、工作年限、过去4年是否管理过结核病患者以及是否有结核病史。

      针对每个调查对象开展可疑症状调查及胸片拍摄，所有疑似病例均转诊至结核病定点医疗机构进行进一步的确诊。

      （三）血液采集和实验室检测

      针对每名调查对象采集血液样本用于结核感染的检测，两种检测方法（AIMTB Rapid Test Assay和QFT Plus）的操作均严格按照产品说明书进行，检测流程见图1。

      （四）统计分析

      采用SAS 9.4和GraphPad Prism 8进行统计分析。卡方检验用于比较分类变量的组间差异，Wilcoxon秩和检验用于比较定量变量的组间差异；多因素分析采用非条件logistic回归；Kappa系数（K）用于评估两种检测方法之间的一致性。K>0.75表示一致性较好，K<0.4表示一致性较差。

      （一）研究对象的基本特征

      625名登记在册的乡村医生中，519名调查对象（83.04%）参与了调查。排除8个信息不全的调查对象后，511个调查对象纳入最终分析。

      调查对象的基本人口学信息见表1。62.62%（320/511）的调查对象为男性以及81.02%（414/511）的调查对象年龄≥40岁。约四分之一（23.29%, 119/511）的调查对象有吸烟史。52.64%（269/511）的调查对象工作年限≥26年，且大约四分之一（24.85%, 127/511）的调查对象在过去4年管理过结核病患者。QFT Plus和AIMTB Rapid Test Assay的阳性率分别为20.94%（107/511）和24.85%（127/511）。两种检测方法各有3个不确定结果。

      （二）MTB感染相关的危险因素分析

      MTB感染相关的危险因素分析结果见表2。男性（OR=2.33, 95%CI: 1.23 ~ 4.43）和工作年限≥26年（OR=2.44, 95%CI: 1.26 ~ 4.72）与MTB感染显著相关。

      （三）AIMTB Rapid Test Assay和QFT Plus检测的一致性分析

      如表3所示，排除两项检测方法任一结果为不确定的5名调查对象后，506个调查对象纳入了一致性分析。结果显示，两者的一致性率为94.47%（K=0.84, 95%CI: 0.79 ~ 0.90）。

      两种检测方法的一致性在男性（K=0.86, 95%CI: 0.80-0.92）中高于女性（K=0.76, 95%CI: 0.62-0.91）。此外，两种检测方法的一致性在工作年限≥26年的调查对象中更高(K=0.85；95%CI: 0.78-0.91)（表3）。

      （四）两种检测方法的定量结果分析

      按照两种检测方法的结果是否一致将调查对象分为四组：QFT-Plus-/AIMTB-、QFT-Plus+/AIMTB+、QFT-Plus-/AIMTB+和QFT-Plus+/AIMTB-。对于AIMTB Rapid Test Assay，IFN-γ水平在QFT-Plus-/AIMTB+组显著高于QFT-Plus-/AIMTB-组（P<0.001)（图2）。对于QFT-Plus，IFN-γ水平在QFT-Plus-/AIMTB+组也显著高于QFT-Plus-/AIMTB-组（P<0.001)（图2）。

研究发现，在村医人群中AIMTB Rapid Test Assay和QFT Plus之间具有良好的一致性。由于AIMTB Rapid Test Assay不需要复杂的检测技术，报告结果更快，成本更低，因此更适合在资源有限的地区为重点人群提供结核潜伏感染的筛查，在预防性干预技术路径中具有广阔的应用前景。在目前结核感染检测缺乏病原学金标准的情况下，该研究结果还需要在更大样本量的不同人群中做进一步的验证。