点击蓝字
关注我们
文章来源：中国防痨杂志, 2024, 46(12): 1448-1458.
doi:10.19982/j.issn.1000-6621.20240275.
基金项目：河南省教育厅项目 (23A360023)
作者：陈飞飞1, 郑永智2, 吴素芳1, 康乾2, 晋春阳2
作者单位：1河南省胸科医院结核病科, 郑州 450000; 2河南省中医院关节科, 郑州 450000
通信作者：陈飞飞, Email: cff15890688270@126.com
摘要
目的: 探讨活性氧 (reactive oxygen species, ROS)/蛋白激酶RNA样内质网激酶 (protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase, PERK) 信号通路对卡介苗 (BCG) 感染引起的RAW264.7小鼠巨噬细胞铁死亡的调控作用。
方法: 采用铁死亡螯合剂去铁胺 (deferoxamine, DFO) 研究铁死亡在BCG感染诱导细胞死亡中的作用，将RAW264.7细胞分为对照组、BCG组、DFO组、BCG+DFO组；采用PERK抑制剂GSK2606414研究PERK信号通路在BCG感染诱导细胞铁死亡中的作用,将RAW264.7细胞分为对照组、BCG组、GSK2606414组、BCG+GSK2606414组；采用ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸 (N-acetylcysteine, NAC) 观察ROS在调控PERK中的作用，将RAW264.7细胞分为对照组、BCG组、NAC组和BCG+NAC组。通过比色法检测细胞乳酸脱氢酶 (lactate dehydrogenase, LDH) 释放率、Fe2+、谷胱甘肽 (glutathione, GSH) 及脂质过氧化水平；通过蛋白免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4, GPX4)、磷酸化PERK (p-PERK)、活化转录因子4 (activating transcription factor 4, ATF4) 及C/EBP同源蛋白 (C/EBP-homologous protein, CHOP) 表达水平；通过流式细胞术检测ROS含量；通过免疫荧光法检测p-PERK蛋白水平；通过菌落形成单位 (colony-forming unit, CFU) 实验计算BCG在细胞内的存活。
结果: 与BCG组比较，BCG+DFO组细胞存活率[(84.72±3.62)% vs. (58.41±2.73)%]、GSH水平[(8.85±0.54)μmol/mg vs. (4.81±0.36)μmol/mg]和GPX4蛋白相对表达水平(0.82±0.06 vs. 0.33±0.03)升高 (t=-4.263, P=0.004; t=-10.116, P<0.001; t=-10.519, P<0.001)，LDH释放率[(15.70±3.18)% vs. (56.24±4.98)%]、Fe2+含量[(8.15±0.64)μmol/mg vs. (18.68±1.27)μmol/mg]和脂质过氧化水平[(22.18±2.24)% vs. (58.13±4.47)%]均明显降低 (t=35.982, P<0.001; t=20.203, P<0.001; t=32.528, P<0.001)。与BCG组比较，BCG+GSK2606414组细胞中p-PERK蛋白相对表达水平 (0.23±0.02 vs. 0.69±0.04)、ATF4蛋白相对表达水平 (0.39±0.02 vs. 0.91±0.06) 和CHOP蛋白相对表达水平 (0.24±0.03 vs. 0.61±0.04)，以及Fe2+[(11.70±0.91)μmol/mg vs. (17.92±1.22)μmol/mg]和脂质过氧化[(19.17±1.75)% vs. (53.28±3.01)%]水平均明显降低 (t=17.177, P<0.001; t=21.024, P<0.001; t=19.358, P<0.001; t=11.999, P<0.001; t=30.292, P<0.001)，细胞中GPX4蛋白相对表达水平 (0.57±0.04 vs. 0.20±0.02) 和GSH水平[(8.15±0.47)μmol/mg vs. (4.69±0.22)μmol/mg]则明显升高 (t=-15.044, P<0.001; t=-9.316, P<0.001)。此外，BCG感染GSK2606414处理后的巨噬细胞，其24 h和48 h的菌载量[(1.72±0.15)×105CFU和(1.48±0.12)×105CFU]较BCG组[(3.51±0.28)×105CFU和(2.94±0.21)×105CFU]明显降低 (t=17.576, P<0.001; t=15.225, P<0.001)。与BCG组 (3.24±0.14) 比较，BCG+NAC组细胞中的相对ROS水平 (1.59±0.11) 明显降低 (t=20.215, P<0.001)。BCG感染NAC处理后的巨噬细胞，其24 h和48 h的菌载量[(0.91±0.12)×105CFU和(0.80±0.13)×105CFU]较BCG组[(2.18±0.18)×105CFU和(2.37±0.21)×105CFU]明显降低 (t=16.672, P<0.001; t=20.630, P<0.001)。
结论: BCG感染诱导的巨噬细胞铁死亡与ROS/PERK信号的激活有关。
关键词: 分枝杆菌, 结核；巨噬细胞；铁死亡；活性氧
参考文献略
注：除非特别声明，本公众号刊登的所有文章不代表《中国防痨杂志》期刊社观点。
编辑：孟 莉
审校：范永德
发布日期：2024-12-18
关注我们
《中国防痨杂志》期刊社
