单链建库技术：解决低质量DNA甲基化建库难题神器

文摘 2024-10-08 18:04 广东

基于NGS的甲基化检测中，重亚硫酸氢盐转化(Bisulfite conversion, BS) 是DNA甲基化检测的“金标准”，转化率可达99%以上。传统的甲基化文库是基于双链建库方式进行，重亚硫酸盐处理过程中剧烈的温度和 pH 变化会导致 DNA 降解和断裂，因此建库需要的DNA起始量高。在微量样本及严重降解样本中，完整的双链DNA较少，存在文库转化效率较低，建库失败风险，测序数据质量偏差等问题。

为了克服解决低质量DNA甲基化建库问题，艾斯基因基于单链DNA建库技术构建甲基化文库，实现超低起始量（低至10ng DNA）建库，有效保留更多较短、降解和碎片化的DNA 信息，实现高灵敏、无偏好性、覆盖度更均一的甲基化信息检测，助力更高水平甲基化研究！

单链DNA建库技术原理

甲基化转化：

重亚硫酸盐（Bisulfite）处理DNA，使未甲基化的C转化为U；

DNA变性：

双链DNA变性为单链DNA；

3’接头连接：

TdT末端转移酶催化单链DNA的3’羟基端加上同聚物尾巴（poly C），E.coli DNA Ligase 连接3’接头；

二链合成：

DNA Ploymerase I或Klenow Fragment进行单链DNA互补链合成；

5’接头连接：

T4 DNA Ligase 连接5’接头；

文库扩增：

耐U高保真DNA聚合酶扩增，获取含有完整接头序列的上机文库。

关于艾斯基因

创建于2016年，隶属于国家高新技术企业和创新型中小企业。核心团队是国内最早一批表观多组学科研技术开拓者之一，在Nature、Cell等顶级期刊发表论文数十篇。公司全力打造赋能基础科研、精准医学及人群队列研究的 “创新多组学1+N” 技术服务体系，服务于每一个合作项目。每年为 70+海外和国内企业客户、200+ 高校和医院等客户提供10万例样本的技术服务。

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艾斯基因

艾斯基因是国内最大的表观组甲基化服务商，专注表观创新多组学，提供表观全景解决方案：DNA甲基化/羟甲基化、DNA染色质互作、RNA甲基化等技术服务，年为 100+海外和国内企业客户、200+ 高校和医院等客户提供10万+ 例样本的技术服务。

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