西安蓝晓科技新材料股份有限公司
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蓝晓科技Pd oneS填料与质粒 DNA能高效特异性的结合，通过洗杂将 RNA、内毒素和 HCP等物质去除，此外可有效分离开环质粒和超螺旋质粒，提高超螺旋质粒的浓度。质粒 DNA经过 Pd oneS填料纯化后，用异丙醇沉淀法进行沉淀，最后再使用 70%乙醇洗涤和沉淀，能够获得高质量质粒 DNA，可直接用于酶切、PCR、测序、转化等分子生物学实验。Pd oneS填料不仅可以实现一步纯化scDNA，同时还能够有效去除内毒素与其他杂质，操作简便，可充分提高实验效率。
使用 50mL重力柱进行纯化可得到约10~20mg质粒 DNA（不同质粒 DNA收率略有差异），纯化效果良好证明 Pd oneS树脂填料具有良好的放大效应，纯化效果如下图所示：
1 装柱
按照重力柱的装填流程操作。依次将下筛板，填料，上筛板装入重力柱管中。
2 平衡
使用 2~5倍柱床体积（CV）的平衡缓冲液平衡柱子，平衡缓冲液：50mM Tris-HCl，0.25M NaCl，10mM EDTA，pH 7.5，务必使流出液的电导和 pH同上样缓冲液的电导和 pH完全一致。
3 上样
（1）样品前处理：使用碱裂解法制备样品，浑浊的样品要离心和过滤后上样。建议 5:1 重悬菌泥（体积质量比），然后加入 0.2M NaOH，1% SDS处理 4-10min，注意加入碱后要缓慢搅拌。碱裂解的过程要注意碱的加入方式及接触时间，避免质粒发生不可逆损伤而影响质粒 DNA的回收率。最后使用 3M醋酸钾pH5.5中和裂解液，静置 30min后，将裂解液离心取上清或者使用膜过滤澄清后上样。
（2）上样：上样样品一般使用现制现用，不建议使用久置样品，影响纯化效果。上样结束后使用 1~2CV的平衡缓冲液进行淋洗。
4 洗杂 ：
使用洗杂缓冲液去除RNA、内毒素和 HCP等物质，为了尽量提高样品纯度，建议使用 3~5CV清洗或更高。洗杂缓冲液：50mM Tris-HCl，0.45 M NaCl，10mM EDTA，pH 7.5。
5 洗脱
（1）使用洗脱缓冲液进行洗脱，建议用1~2CV的洗脱缓冲液洗涤，确保质粒 DNA的洗脱效率。洗脱缓冲液：50mM Tris-HCl，1.25M NaCl，10mM EDTA，15%的异丙醇，pH 8.5。
（2）样品后处理：在洗脱液中加入终浓度大于 30%的异丙醇进行沉淀，4℃静置30min后，≥10000g离心 20min，然后去上清（禁止晃动，减小损失），迅速加入 1/4洗脱体积的 70%或无水乙醇洗涤质粒 DNA样品，4℃静置 30min后，≥10000g离心 30min，最后温和的移去上清禁止晃动，避免固体颗粒移除，尽量减小损失），待离心管乙醇完全挥发后使用超纯水或核酸保藏 Buffer进行复溶，保藏备用。
6 原位清洗（CIP）
质粒纯化结束后，首先用超纯水清洗重力柱 3CV，然后使用 0.5M NaOH溶液对重力柱进行原位清洗，使用 2CV的氢氧化钠溶液浸泡 15~30min，或者使用 5CV的氢氧化钠溶液动态清洗。
7 存储
密封保存在 4~30℃（保存溶液为20%乙醇）干燥、通风、清洁处，不可冷冻；用过的重力柱保存在 4~8℃，20%乙醇溶液。
8 运输
运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
| 产品牌号 | 货号 包装规格 | 包装规格 |
| Pd oneS | PS10335M2-2 | 25ml |
| PS10335M2-3 | 100ml | |
| PS10335M2-4 | 500ml | |
| PS10335M2-5 | 1L | |
| PS10335M2-6 | 5L | |
| PS10335M2-7 | 10L |
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