西安蓝晓科技新材料股份有限公司
苏州蓝晓生物科技有限公司
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mRNA纯化亲和填料（Seplife Oligo dT)
Seplife Oligo dT是蓝晓科技自主研发的一种新型高刚性亲和填料，主要用于捕获mRNA。Seplife Oligo dT以聚苯乙烯为基质，具有均一的超大孔径，表面进行了特定的长链间隔臂修饰并键合了自主开发dT配基，官能化聚(dT)基团，通过与mRNA 的polyA 尾巴碱基配对，可以高效捕获mRNA，提高生产效率，具有高载量和特异性结合力，非特异性吸附低，可耐受高温（65℃）。
图1：蓝晓科技 Seplife Oliogo dT纯化mRNA原理图
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Seplife Oligo dT填料特点
✔领先的喷射法单分散微球，更稳定，分辨率更高
✔聚苯乙烯微球，最大耐压可达10MPa
✔独家精准制孔技术，更适合mRNA传质
✔先进制造工艺，零RNase引入
✔自主开发的dT配体，更好的特异性
✔载量高2.5mg/ml（200nt，polyA），不同mRNA有差异
✔刚性材质，适用面更广，兼容各种原液
✔流速快，适合大规模生产使用
✔自主知识产权产品，稳定的供货能力
Seplife Oligo dT亲和填料技术参数
Seplife Oligo dT填料使用方法：
1. 平衡
使用 3–4 CV 平衡缓冲液平衡柱子，常用缓冲液为 10 mM Tris-HCl,0.5 M NaCl, 1 mM EDTA,pH 7.4.
2. 样品准备
mRNA 样品用平衡缓冲液混匀，常用缓冲液为 10mMTris-HCl, 0.5M NaCl, 1mM EDTA, pH7.4。如需变性，可将样品置于 65℃的水浴中加热 10-15min，然后立即将样品置于冰上。
3. 上样
以 50-150 cm/h 的流速上样。
4. 淋洗
首先，用平衡缓冲液 10mMTris-HCl, 0.5M NaCl, 1mM EDTA, pH 7.4 淋洗 2-3 CV。然后，用 10 mM Tris-HCl,100-300 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 7.4，淋洗 3-5 CV，直至电导走平。
5.洗脱
一般洗脱结合的 mRNA 用 3-5 CV，10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA, pH 7.4 ；或者使用超纯水3-5 CV，进行洗脱。备注：提高温度至 65℃，可以有效提高洗脱速率。
6. 再生
再生缓冲液需要根据样品的纯度、组成确定。常用超纯水 3-5 CV。对于结合较强的杂质需要使用含 0.5M NaOH 的 20-30%乙醇溶液清洗 3-5 CV。
7. 在位清洗
先用 3-5CV 0.1M NaOH 冲洗，再用平衡缓冲溶液清洗 3-5CV，直至电导不变。
更详细的信息请联系蓝晓科技：0512-65160522
Seplife Oligo dT填料应用
在mRNA体外制备过程中，纯化后的质粒经内切酶线性化，用阴离子交换层析Seplife LXMS 30 Q 纯化，纯化的DNA模板加入逆转录酶及dNTP进行体外转录，转录后的mRNA溶液中有DNA模板，dNTP等杂质，用亲和层析Seplife Oligo dT捕获mRNA，在用加帽酶进行加帽，加帽后再次用Seplife Oligo dT亲和层析纯化，亲和层析后用Seplife LXMS 30 Q或Q Large Scale 精细纯化，纯化后无菌过滤并进行LNP制剂。
应用案例1：
图注：1200nt mRNA 样品纯化
载量2mg/ml，回收率大于90%，纯度合格
Seplife Oligo dT填料订购信息
产品牌号 | 货号 | 包装规格 |
Seplife Oligo dT | PS11225(50)1-1 | 25ml |
PS11225(50)1-2 | 100ml | |
PS11225(50)1-3 | 500ml | |
PS11225(50)1-4 | 1L | |
PS11225(50)1-5 | 5L | |
PS11225(50)1-6 | 10L |
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