西安蓝晓科技新材料股份有限公司
苏州蓝晓生物科技有限公司
联系电话：0512-65160522
概述
在生物医药的各个生产阶段，纯化成本占整体生产成本的比例高达50%~80%。其中层析填料的成本又在整个纯化工段中有着举足轻重的地位。延长层析填料的使用寿命可以显著降低生产成本，而在纯化生产过程中，层析填料可以有效去除多种杂质，如宿主蛋白质、内毒素、色素等。
据文献报道，色素广泛存在于蛋白质中间体和最终原液中，具体表现为蛋白质中间体和原液呈现不同的颜色，尤其在高浓度蛋白质溶液中尤为显著，如：铁离子形成的黄色、黄褐色网，维生素B12形成的粉色以及镍离子形成的蓝色，其中以黄褐色最为普遍。这些元素主要来自培养基和中间体所接触到的铁质工艺设备，如不锈钢容器及管道等。
色素污染层析填料的具体表现是含有色素的中间体在层析系统上样过程中，色素会首先与层析柱上层填料结合，导致层析填料由乳白色变成色素相应的颜色，随着上样量和填料循环数的增加，色素会逐步扩散到中下层填料，严重时色素等杂质带来的污染能让层析柱内的填料塌陷。通常情况下，这些填料吸附的色素会被后续再生工序中的再生液去除，从而恢复填料性能，也避免吸附在填料上的杂质污染下一个工艺循环，将蛋白质原液的杂质残留降至最低，从而减淡蛋白质中间体的颜色，实现更好的原液质量。
但在某些特殊情况下，我们发现用常规的方法无法去除填料中的色素，积累的色素将导致填料的使用寿命降低，具体表现是填料载量明显下降，填料外观颜色变深。
层析填料中沉积色素的去除
色素是一类物质，不同来源的色素的清洗过程差异较大，可根据介质的性质及色素的性质进行清洗，碱洗，酸洗，有机溶剂，及去污剂，变性剂都可以尝试。
➤铁离子残留带来的黄褐色去除：
0.1M 乙酸+2M NaCl或者0.5M磷酸。
➤疏水作用力结合的色素去除：
0.5-1M NaOH
➤脂类色素：
0.5M 非离子去污剂，70%乙醇，30%异丙醇
➤沉积的顽固色素：
1M醋酸，1M NaOH+2M NaCl,6M盐酸胍，8M尿素，8M尿素+2M NaCl+0.5M乙酸
以上试剂CIP去除层析填料中沉积色素时，保留时间控制在20-30min，无法分辨是那种色素时，需要实验去验证那种试剂CIP可以去除沉积的色素。
层析填料中沉积色素清洗注意事项
➤清过程要综合考虑污染物的类型及介质的种类，清洗的同时要减少对介质的损伤。
➤清洗时通常需要多种方法组合使用，清洗过程并非是固定不变的。
➤清洗试剂应选择纯度高的试剂，避免二次污染。
➤清洗之后要立即洗到中性保存。
➤清洗状态的确定及方法的确定要结合整个工艺过程。
➤清洗之后要对清洗过程进行验证，保证清洗目的实现，可通过测定载量，流速等介质的性能指标验证。
参考资料
1. MAERTEN P.SHEN C.DE HERTOGH G.et al.Agonistic anti-4-Ibb (cd 137)monoclonal antibody (mab)aggravexperimental colitis.but do not abrogate tolerance in the T cell transfer model of colitis JI.Environmental Microbiology.20016(1):60-71
2. WANG Z.ZHU J.LU H.Antibody glycosylation:impact on antibody drug characteristics and quality control]Applied Micrbiology and Biotechnology,2020.104(5):1905-1914.
免责声明
苏州蓝晓生物科技有限公司是蓝晓科技（股票代码：SZ 300487）全资子公司，依托蓝晓科技20多年在分离吸附材料领域丰富的经验和技术积累，在后疫情时代及药品集采的时代背景下应运而生。苏州蓝晓生物科技，在蓝晓科技雄厚资本的支持下，在蓝晓科技生命科学事业部数10年产品研发和技术积累的基础上，汇聚50多人的研发团队，提供从细胞培养及分离纯化到系统装置完整的解决方案，我们将全力助力生命科学及生物制药产业的高质量发展。
ID：seplife300487
电话：0512-65160522
官方网站：www.sunresin-seplife.com
