真菌检测知多少
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近年来，随着临床诊疗方案日趋复杂，各种侵入性操作、广谱抗生素、免疫抑制剂、糖皮质激素以及肿瘤化疗药物的广泛使用，侵袭性真菌感染（invasive fungal infection，IFI）发生率逐年升高。2022年10月世卫组织（WHO）首次列出了19种构成公卫风险的真菌，真菌感染及其对治疗日益增加的耐药性是一个越来越大的风险。
表1 WHO重点真菌病原体清单
近五年来，国内外多项侵袭性真菌病（Invasive fungal disease，IFD）相关指南和共识陆续更新，帮助我们提高真菌感染的诊治水平。真菌的快速精准诊断手段及有效治疗成为救治患者的重要方面，早期识别高危因素，早诊早治可显著改善预后。
真菌病实验室诊断方法可大致分为哪几类?
1
直接镜检
真菌直接镜检操作简便、适用多种临床样本（支气管肺泡灌洗液（BALF）、痰液、尿、粪、分泌物、脑脊液、引流液等），可快速报告结果，有重要临床价值，染色方法有多种：革兰染色、墨汁染色、乳酸酚棉蓝染色、荧光染色等。
真菌直接镜检敏感性不高，阴性不能完全排除真菌感染，多次送检能提高检出率。
2
培养
真菌培养是真菌感染的重要诊断方法，对于诊断感染以及确认致病真菌种类有重要价值。培养出的真菌还可以进行体外药敏检测，指导临床药物选择。
真菌培养所需时间较长，一般需要7 天，特殊情况需要2～4周以上，且真菌培养敏感度不高，阴性结果不能完全排除真菌感染。
3
血清学检查
血清学检查适用于侵袭性真菌病的早期诊断，耗时短，结果报告迅速，是传统真菌学检查有益的补充。不同血清学检查方法的临床意义及适用真菌感染种类不同，在不同高危人群中应用价值也有差异。
1.（1,3）-β-D葡聚糖检测（G试验）：（1,3）-β-D葡聚糖是真菌的细胞壁成分，广泛存在与各种真菌（隐球菌、结合菌除外），对于念珠菌血症而言，G试验检测是首选检查方法。
2.曲霉菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）：半乳甘露聚糖（Galactomannan，GM）是曲霉菌胞壁的组成成分。血清曲霉GM抗原可作为侵袭性曲霉感染的诊断指标，主要适于侵袭性曲霉菌感染（IA）的早期诊断。
3.曲霉IgG/IgE抗体检测: 是机体感染曲霉后产生的特异性抗体，主要用于非中性粒细胞缺乏/非严重免疫抑制患者慢性肺曲霉病（CPA）、侵袭性曲霉病（IA）、亚急性侵袭性曲霉病（SAIA）和过敏性支气管肺曲霉病（ABPA）的辅助诊断，与GM试验联合应用可以覆盖多种曲霉感染。
4.念珠菌甘露聚糖检测（Mn试验）：Mn是念珠菌特异性抗原成分，可作为念珠菌感染的标志物。对于侵袭性念珠菌感染，甘露聚糖抗原检测阳性结果出现早于血培养报阳。
5.念珠菌IgG抗体试验：念珠菌IgG 抗体是机体感染念珠菌后产生的特异性抗体，可与念珠菌甘露聚糖抗原联合检测，提高侵袭性念珠菌感染检测的敏感性和特异性。
6.隐球菌荚膜多糖检测（GXM试验）：荚膜多糖是隐球菌感染的特异性标记物，此试验方法简单，敏感性和特异性高(>90%)，可以实现隐球菌感染（肺炎、脑膜炎）的早期诊断。
4
分子生物学方法
分子生物学方法能在较短的时间内检测到含量很低的真菌DNA，有利于真菌感染的早期诊断。分子生物学方法具有灵敏度高、特异性强、快速检测的特点，可为临床快速诊断提供重要依据。其临床价值已逐渐得到了国内外专家的认可。目前，PCR方法已被纳入国内外指南及共识中，并可作为侵袭性真菌病（IFDs）确诊和临床诊断的微生物学证据，为IFDs的诊断提供了新的手段。
真菌的世界五彩缤纷
真菌的检验方法也多种多样
只有充分了解 合理运用
才能让真菌 “无所遁形”
参考文献
[1] Hage CA, Carmona EM, Epelbaum O.et al.Microbiological Laboratory Testing in the Diagnosis of Fungal Infections in Pulmonary and Critical Care Practice. An Official American Thoracic Society Clinical Practice Guideline.Am J Respir Crit Care Med. 2019 Sep 1;200(5):535-550.
[2] Tsang CC, Teng JLL, Lau SKP, Woo PCY. Rapid Genomic Diagnosis of Fungal Infections in the Age of Next-Generation Sequencing. J Fungi (Basel). 2021;7(8):636. Published 2021 Aug 5. doi:10.3390/jof7080636；
[3] Nana Song , Xiaofang Li, Weida Liu. Metagenomic next-generation sequencing (mNGS) for diagnosis of invasive fungal infectious diseases: a narrative reviews.[J] .JLPM, 2021.
[4]血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则（第六次修订版）[J]. 中华内科杂志, 2020,59(10) : 754-763.
[5]侵袭性真菌病实验室诊断方法临床应用专家共识[J]. 中华内科杂志, 2022,61(2) : 134-141.
[6]侵袭性真菌病真菌学检查指南[J]. 中华检验医学杂志, 2023, 46(6): 541-557.
供稿：徐兰兰
审核：颜令、牛长春
