插入目的基因后，原先标记的酶切位点“XhoⅠ”消失了，怎么办？
1.检查目的基因酶切位点，是不是选取的酶切位点，在目的基因中也存在，如果存在，插入到质粒载体中后，重组质粒就有两个同样的酶切位点“XhoⅠ”，Snapgene会默认出错，酶切位点消失。
比如，“NdeⅠ”
插入目的基因后，多了一个“NdeⅠ”基因序列，原来标记的酶切位点消失。
2.如果是插入的酶切位点，直接删除就可以。如果不是，那就需要重新查找其他酶切位点。方法还是参照Snapgene构建重组质粒（表达载体）超详细攻略相关内容。
比如，先找到插入的酶切位点
直接删除即可。
3.经检查后，选取的酶切位点没问题，插入后还是不对，怎么回事？可能插入目的基因后，正好与载体酶切位点形成了新的酶切位点，这也是有可能的。继续插入几个基因，把酶切位点隔开就可以，或者查找其他酶切位点。其实这种几率比较小。
小问题，希望说清楚了，祝好！
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