1.确定蛋白质编码区域。也就是开放阅读框ORF。在该编码区，有一个起始密码子（ATG）和一个终止密码子（UAA、UAG或UGA）。
3.转录、翻译大致过程：
除终止密码子外，剩余密码子的数量就是蛋白质中氨基酸的数量。
4.氨基酸平均分子量110Da。
粗略计算：蛋白质分子量（kDa）=氨基酸数量×110Da
比如，表达载体pET-28a。将目的基因插入EcoRⅠ和XhoⅠ之间，转录开始，从启动子开始，有两个起始密码子，从载体上ATG开始到目的基因，这一段编码36个氨基酸，翻译完成，都会表现在目的蛋白质条带上。翻译完成后，你的目的蛋白质应该比预估的大小大3.96kDa。
所以，重组质粒时，应可以仔细检查每一步，其他载体同样。
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