在前面文章中,学习了重组质粒的构建(Snapgene构建重组质粒(表达载体)超详细攻略),如何验证构建是否成功?
通过菌落PCR(菌落PCR,从入门到精通,保姆级教程)、核酸电泳(琼脂糖凝胶电泳技术详细操作步骤和详解),检查是否有目的基因条带或条带是否正确进行验证;
通过摇瓶发酵表达外源蛋白(液体摇瓶发酵培养详细技术指南)、再通过SDS-PAGE电泳进行定性验证(SDS-PAGE电泳技术详细操作步骤和详解),
也可以采用Westernblot(后续补充)和液相(了解一下高效液相色谱技术原理和应用)、气相等方法(后续补充)等方法进行定量检测。
但,这些方法耗时。还有其他方法吗?🈶。继续……
如何快速预测重组质粒是否可以表达外源基因?
2.Snapgene进行预测琼脂糖凝胶电泳
(3)可以更改泳道数量和缓冲液等。
(4)也可以更改MW。凡是蓝色的字体都可以点击并进行修改。
(5)也可以直接选择重组质粒后进行PCR扩增,扩增后的产物片段也会直接显示到琼脂糖凝胶图片上。
(6)其中,鼠标靠近电泳条带,会显示属于哪个片段,大小多少。
(7)在凝胶处,右键,选择“输出凝胶图像或复制凝胶图像”。
可以选择凝胶格式。
(8)打开凝胶图像,检查。
祝好!有问题请留言。
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