如何快速“预测”重组质粒是否构建成功?

文摘   2024-12-31 20:06   北京  
2025突然来袭,有点触不及防,2024年还有很多事情没弄明白,又开始一年,扎心😉。趁着别人休息,我们抓紧学习学习,弯道超车。
继续挖掘Snapgene的功能-聚合酶链反应PCR和预测琼脂糖凝胶电泳。

在前面文章中,学习了重组质粒的构建(Snapgene构建重组质粒(表达载体)超详细攻略),如何验证构建是否成功?

  1. 通过菌落PCR(菌落PCR,从入门到精通,保姆级教程)、核酸电泳(琼脂糖凝胶电泳技术详细操作步骤和详解),检查是否有目的基因条带或条带是否正确进行验证;

  2. 通过摇瓶发酵表达外源蛋白(液体摇瓶发酵培养详细技术指南)、再通过SDS-PAGE电泳进行定性验证(SDS-PAGE电泳技术详细操作步骤和详解),

  3. 也可以采用Westernblot(后续补充)和液相(了解一下高效液相色谱技术原理和应用)、气相等方法(后续补充)等方法进行定量检测。

  4. 但,这些方法耗时。还有其他方法吗?🈶。继续……

如何快速预测重组质粒是否可以表达外源基因?

1.Snapgene进行聚合酶链式反应PCR。
(1)打开重组质粒图谱。在菜单栏中,点击“行动”、“聚合酶链反应(PCR)”。

(2)然后,在聚合酶链反应(PCR)中,选择合适的正向引物和反向引物,进行扩增。

(3)检查扩增产物是否是目的基因表达的氨基酸序列。一般情况,检查前十个氨基酸和后十个氨基酸即可。如果出现易码等,都可以采用这种方法验证。

2.Snapgene进行预测琼脂糖凝胶电泳

(1)打开重组质粒图谱。在菜单栏中,点击“工具”、“模拟琼脂糖凝胶”。

(2)输入酶切位点。在左侧琼脂糖凝胶电泳图片上就显示出相应的片段。

(3)可以更改泳道数量和缓冲液等。

(4)也可以更改MW。凡是蓝色的字体都可以点击并进行修改。

(5)也可以直接选择重组质粒后进行PCR扩增,扩增后的产物片段也会直接显示到琼脂糖凝胶图片上。

(6)其中,鼠标靠近电泳条带,会显示属于哪个片段,大小多少。

(7)在凝胶处,右键,选择“输出凝胶图像或复制凝胶图像”。

 

可以选择凝胶格式。

 

(8)打开凝胶图像,检查。

祝好!有问题请留言。

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