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电转是利用瞬时高压造成感受态细胞膜不稳定，在细胞上形成电穿孔，有利于外源DNA进入宿主菌的方法，适用于化转难以处理的细胞，比如说酵母菌和革兰氏阳性菌的转化，化转明显受限，但电转可以。以毕赤酵母为例学习一下电转化的详细操作说明、操作技巧和注意事项。![]()
1. 受体菌种活化：取-80℃冰箱中保藏的菌株（如GS115）在YPD平板（无抗性）上划线分离，放置于30℃恒温培养箱中倒置培养。参照微生物分离培养技术全攻略相关内容。 2. 受体菌培养：从YPD平板上挑取单菌落，接种于10mLLB液体培养基中，30℃震荡培养12h左右至对数生长中后期。参照生长曲线和无菌技术“规范”操作指南相关内容。3. 菌种的准备：将受体菌菌悬液以2%的接种量接种于装有20mLYPD液体培养基（无抗性）中，30℃震荡培养大约2-3h至OD600=0.8-1.0。参照OD600和菌浓度关系？吸光度？浊度？相关内容 。![]()
4.感受态细胞的制备
(1)离心：把上述菌液转移至离心管中，在4℃，3000r/min，离心10min。(2)重悬：弃上清液，加入1M山梨醇溶液重悬，轻轻混匀后，在4℃，3000r/min，离心10min。(3)重悬：弃上清液，加入含15%甘油的1M山梨醇溶液重悬，轻轻混匀后，在4℃，3000r/min，离心10min。(4)分装：用移液枪分装重悬液至1.5mL离心管中，每个离心管中分装50μL悬浮液。(5)保藏：标记贴标签，使之迅速冷冻，-80℃保藏备用。(1) 处理电击杯：0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5min，待其沥干水分，杯口朝上放置5min，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min充分降温。(2)加入质粒：取-80℃保存的感受态冰浴5min，待其融化，加入预冷的质粒DNA，用手拨打管底混匀，用200μL枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。![]()
(3)电击：启动电转仪，设置参数：C=25μF，PC=200Ω，V=2400V（此参数为Biorad 推荐），将电击杯快速放入电转槽中，电击5ms完成后，快速插入冰中，然后转移至离心管中，加入200μL含1M山梨醇的YPD培养基中，30℃振荡培养2-3h。(4)涂布：取上述培养液50μL涂布于含相应抗生素的平板上，倒置放于30℃培养箱培养2-3天。![]()
不同的菌种电击条件不同，需要参照相应的标准进行设定电击参数。
(2)细胞状态
(3)严格控制浓度
严格控制细胞的生长阶段和菌浓，严格控制质粒DNA的质量和浓度，以提高转化效率。
(4)计算转化率
记录和计算转化率的指标如转化子总数、感受态细胞总数和转化频率以评估转化效率。
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