蔡小明, 吴少明, 余清, 黄何何, 郑秋萍, 何孟杭, 戴明, 欧阳立群*
福建省产品质量检验研究院食品检验研究所,国家加工食品质量检验检测中心, 福建 福州 350002
基于QuEChERS,结合超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术,建立了一种同时测定运动营养食品中60种类固醇激素的分析方法。样品以1.0%(v/v)甲酸乙腈提取,氯化钠进行分层,150 mg PSA和150 mg C18粉末净化,净化液经氮气吹至近干后用50%甲醇水溶液复溶,在Waters Acquity UPLC HSS T3分析柱上,以0.1%(v/v)甲酸水溶液(含10 mmol/L乙酸铵)-甲醇为流动相,电喷雾离子源(ESI)正离子模式下进行UPLC-MS/MS多反应监测(MRM)测定。在最优的仪器参数及前处理条件下进行方法验证,60种类固醇激素在1.0~100 ng/mL范围内具有良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.99;方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.2~0.8 μg/kg和0.6~2.4 μg/kg。以乳清蛋白粉(固体)、果胶蛋白肽(半固体)、运动营养液(液体)为空白基质,进行3个水平的加标回收试验(n=6), 60种类固醇激素的平均回收率为73.7%~112.7%,相对标准偏差(RSD)为3.2%~10.1%。将新开发的方法应用于13批次实际样品的测定,在其中1份样品中检出禁用药物(勃地酮),含量为14.6 μg/kg,说明运动营养食品中确有非法添加类固醇激素的现象,后续应加强对运动营养食品中该类固醇类激素的监控。该方法简单高效,灵敏度高,重复性好,适用于运动营养食品中类固醇激素的快速筛查和定量分析,为运动营养食品中类固醇激素的日常监督提供技术支撑。
分别准确称取粉碎后的固体或半固体样品2 g,液体样品(运动营养液)5 g,加入5 mL水(液体样品除外),涡旋混匀后再加入10 mL 1.0%(v/v)甲酸乙腈,于超声波清洗机中提取20 min,加入3 g氯化钠粉末摇匀,再以4500 r/min离心3 min,准确移取上层清液6.0 mL于塑料离心管中,加入PSA和C18粉末各150 mg,涡旋净化30 s后以4500 r/min离心3 min,再准确移取5.0 mL净化液于玻璃刻度管中,在40 ℃水浴中氮吹浓缩至近干,加入1.00 mL 50%甲醇水溶液溶解残渣,涡旋混匀过0.22 μm微孔有机滤膜后经UPLC-MS/MS测定。
色谱柱为Waters Acquity UPLC HSS T3 (100 mm×2.1 mm, 1.8 μm);流动相A为0.1%(v/v)甲酸水溶液(含10 mmol/L乙酸铵),流动相B为甲醇;柱温为40 ℃;流速为0.3 mL/min;进样量为5 μL;梯度洗脱程序:0~7.00 min, 40%B~95%B; 7.00~9.00 min, 95%B; 9.00~9.01 min, 95%B~40%B; 9.01~11.00 min, 40%B。
电喷雾离子源(ESI),正离子、多反应监测模式(MRM);接口电压为4000 V;加热块温度为400 ℃;雾化气流速为3 L/min;干燥气流速为10 L/min。60种化合物的定性、定量离子对及其他质谱参数见原文表1。
采用新开发的方法,对市售13批次运动营养食品进行60种类固醇激素的筛查,结果共检出5份阳性样品,其中4份乳清蛋白粉样品中检出内源性激素(孕酮),含量为12.6~25.4 μg/kg; 1份运动营养液中检出勃地酮,该药物属于运动员禁用药物,含量为14.6 μg/kg,说明运动营养食品中确有非法添加类固醇激素的现象,国家相关部门应加强对运动营养食品中该类物质的监控。
本研究建立了超高效液相色谱-串联质谱法同时测定运动营养食品中60种类固醇激素的高通量方法。该方法采用QuEChERS的前处理方式,操作简单、高效,重复性好,灵敏度高,适用于运动营养食品中类固醇激素的快速高通量筛查以及定量分析,填补了当前运动营养食品中类固醇激素测定方法的空白,可为该类食品中类固醇激素的日常监督提供技术支撑。此外,利用本研究建立的方法对实际样品中类固醇类激素进行测定,结果表明运动营养食品中确有添加类固醇类激素的现象,希望国家相关部门尽快建立国家食品安全标准,对该类食品中类固醇激素进行日常监督。
色谱, 2024, 42(12): 1173-1188
DOI: 10.3724/SP.J.1123.2024.03020
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https://www.chrom-china.com/article/2024/1000-8713/1000-8713-42-12-1173.shtml
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