真菌保藏是微生物学研究和工业应用中的一个重要环节，其目的是长期保持真菌菌株的活性和遗传稳定性。以下是几种常见的真菌保藏方法，以及它们的操作步骤和优缺点：
1. 液体石蜡保藏法
这是一种变相的传代培养方法，能够适当延长保藏时间。它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可保持水分，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
①将液体石蜡分装于试管内，塞上棉塞，并用牛皮纸包装，121℃下灭菌30分钟，然后在40℃温箱中蒸发水汽备用。②将需要保藏的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，得到健壮的菌体。③用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，液面高出斜面顶端1cm，使菌种与空气隔绝。2. 真空冷冻干燥保藏法
原理是菌体冷冻后在减压下利用升华现象除去水分，使细胞的生理活动停止；去除氧气后密封，达到长期维持生命状态的目的。该方法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，适用于大多数产孢子真菌。
①准备安瓿管，安瓿管宜采用中性玻璃制造，事先在2% HCl中浸泡过夜，自来水冲洗3次后，蒸馏水刷净，干燥，插标签，塞棉塞，121.3℃灭菌30分钟备用。②准备10％脱脂牛奶溶液：115℃灭菌15分钟，在37℃温箱中培养过夜，观察灭菌效果。④制备菌悬液与分装：将4ml左右脱脂牛乳溶液加入斜面试管中，用挑针在菌落上反复刮擦，使菌丝体片断和孢子脱落，制成菌悬液，每支安瓿管分装0.2 ml。⑤冻结：将分装好的安瓿管放低温冰箱的冷冻格中冻结。⑥干燥：安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内。抽气一般若在30分钟内能达到93.3Pa（0.7mmHg）真空度时，则干燥物不致熔化，以后再继续抽气，几小时内，肉眼可观察到被干燥物已趋干燥，一般抽到真空度26.7Pa（0.2mmHg），保持压力6-8小时即可。⑦封口：干燥完成后，先用火焰烧软安瓿管中部，拉伸成细颈状；然后接在封口用的L形连通管抽气，可达到90%真空状态时，以火焰在安瓿管细颈中央进行熔封。封口以后，保存于冰箱或室温暗处。3. 液氮超低温冻结保藏法
将菌种悬液在控制速度冻结后，贮藏在液氮超低温储藏罐中。该保藏方法操作简单，要求具备液氮存储设备，并持续供应液氮。该保藏方法适宜于大多数真菌种类（产孢和不产孢），而且可以保证性状不变异。
①准备保护剂，如10％甘油溶液、10％二甲亚砜溶液。②将菌种与保护剂混合后，转移至-80℃冰箱或液氮中保存。③恢复培养时，将冻存管取出，立即放入38-40℃的水浴中进行快速解冻，直到全部融化。菌体移入适宜的培养基上培养。4. 斜面低温保藏法
将菌种接种在固体斜面培养基上，待菌充分生长后，移至2—8℃的冰箱中保藏
5. 其他方法
除了上述方法，还有如蒸馏水保藏法、沙子保藏法、硅胶保藏法等，这些方法各有特点，适用于不同的真菌种类和实验室条件。选择合适的保藏方法需要考虑真菌的种类、实验室条件以及预期的保藏时间。正确的保藏方法能够确保真菌菌株的活性和遗传稳定性，对于科研和工业生产都至关重要。
进蛋白纯化技术交流群，请添加我们的微信后邀请进群：![]()
