液枪在实验室中扮演着至关重要的角色,它用于精确地测量和转移液体。正确操作移液枪对于确保实验数据的准确性和实验者的安全都是至关重要的。因此,了解并遵循正确的使用指南和注意事项是必不可少的。
移液器移液原理:活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液和放液。在活塞推动下,排出部分空气,利用大气压吸入液体,再由活塞推动空气排出液体。使用移液枪时,配合弹簧的伸缩性特点来操作,可以很好地控制移液的速度和力度。移液器的正常操作体积范围通常是其指示量程的10%到100%。虽然这个范围是可行的,但随着设定体积的减少,性能参数也会有所变化。例如,一个100微升的移液器在量程的50%到100%时,其准确性参数可以达到±0.8%。但是,如果您尝试移取10微升(即量程的10%),那么不准确度可能会增加到原来的三倍,大约在2.5%到3%之间。
为了获得最佳性能,建议的操作量程是指示量程的35%到100%。通常不建议将移液器的体积设定低于其最大容量的10%。在需要进行小体积移液时,应选择相应小量程的移液器以确保准确性。
确保吸头浸入的深度适当,对于提高移液的准确性至关重要,尤其是在使用微量移液器时。以下是针对不同量程移液器的浸入深度建议:①微量移液器:吸头应浸入1-2毫米。②大容量移液器:浸入深度应为6-10毫米。如果吸头浸入过深,吸头内部的空气会被压缩,导致吸入过量的液体。这不仅会影响移液的准确性,还可能在吸头表面留下残留液体,进而影响实验结果。相反,如果吸头浸入不足,可能会吸入空气,导致气泡形成和移取体积不准确。这两种情况都可能导致移液体积的不准确。为了确保准确性,请遵循以下建议:①适当浸入:根据移液器的类型调整吸头的浸入深度。②避免过深:防止空气被压缩和液体过量吸入。③防止气泡:确保吸头充分浸入,避免吸入空气和气泡形成。
在进行液体吸取操作时,保持吸头与样品垂直对齐是提高准确性的关键。以下是一些具体的操作建议:①垂直浸入:在吸取液体时,尽量使吸头以90度角垂直浸入样品中。②角度控制:避免偏离垂直位置超过20度,以确保准确性。以垂直角度吸取溶液可以提高约2.5%的准确性。如果偏离垂直超过20度,可能会导致不准确的量取,吸入过多的液体。以60度角浸入可能会导致吸取的液体量超过设定值的0.7%。
为了获得更理想的、具有高重复性的实验结果,保持一致的移液节奏和速度至关重要。以下是一些具体的操作建议:①保持节奏:在移液过程中,保持一致的节奏。②控制速度:在整个移液过程中,保持速度的一致性。
正确识别润洗吸头的适用场景对于提高移液准确性至关重要。以下是一些具体的操作建议:①润洗吸头:在某些情况下,润洗吸头2-3次可以在吸头内形成同质膜,从而提高0.2%的准确性。这是因为润洗可以中和微量移液中的毛细效应,对于大体积移液,这可以使吸头内部温度与样品温度一致。需注意的是,当移取热的或冷的溶液时,润洗可能会对移液的准确度产生不利影响。如从冰浴中移液或者溶液温度超过37摄氏度时,润洗可能会造成高达5%的错误率。
润洗吸头的方法:将吸头侵入液体中,反复按压活塞按钮2~3次。操作前:在使用之前一定确保移液枪准确,主要包括:刻度是否正确,否则重新校验观察移液液面在枪头的位置,估算移液枪的准确度观察移液枪是否漏液,如漏液,可能是移液枪老化或枪头与移液枪结合不紧密吸排液体是否吃力,如吃力,可能是弹簧失灵或者需要抹油移液枪的使用步骤大体可以分为:定容量-安装枪头-润洗枪头-吸取液体-排出液体-退枪头步骤1-定容量:根据要吸取液体的体积选择合适的量程。切不可用大量程吸取小体积液体,选择最大量程接近所吸取液体体积的移液枪。Tips:从大体积调节至小体积时,为正常调节方法,逆时针旋转刻度即可,从小体积调节至大体积时,可先顺时针调至超过设定体积的刻度,再回调至设定体积,可步骤2-安装枪头:对于单道移液枪,未端垂直插入吸头,轻压左右微微转动即可上紧;对于多道移液枪,一道对准头一个吸头,倾斜插入,前后稍许摇动上紧即可。Tips:安装枪头不要暴力,不要上下砸动,会导致移液枪损害,甚至会导致调节刻度的旋钮卡住。步骤3-润洗枪头:粘稠液体可以通过润洗枪头的方式来达到精确移液,先吸入样液、打出,吸头内壁会吸附一层液体,使表面吸附达到饱和,保证准确性。Tips:如果是有机溶剂或者高挥发性液体需要润洗4-6次;但是高温或低温液体不要润洗,否则可能导致枪头变形。正向吸液:吸液时将按钮按到第一档,放液时先按下第一档,打出大部分液体,再按下第二档,将余液排出。反向吸液:吸液时将按钮按到第二档,这样会多吸入一些液体,放液时只要按下第一档即可。多吸入的液体可以补偿吸头内部的表面吸附,反向吸液一般与润洗枪头方式结合使用,适用于粘稠或易挥发液体。Tips:吸取液体时要做到缓慢、匀速、垂直、伸入深度适中,防止液体飞溅或产生气泡;伸入液面深度为以液体为准,0.1-10ul为1-2mm,10-200ul为2-3 mm,200-1000 ul为3-6 mm。步骤5-排出液体:排出液体时枪头尖端靠在容器内壁排出,如果液体特别稀少,则要直接排到液面以下(防止沾到壁上)。Tips:如果是非粘稠或易挥发液体,一档排出再用二档排出后停顿1s确保排出干净,将移液枪移开容器以后释放按钮,否则会回吸。步骤6-退枪头:按下吸头脱卸按钮,将废弃枪头丢到垃圾桶。为了维护移液枪的性能和延长其使用寿命,以下是一些维护和保养的建议:1.弹簧保护:如果不使用移液枪,应将其量程调至最大值,使弹簧保持松弛状态。2.定期清洗:建议定期使用肥皂水或60%异丙醇清洗移液枪,然后用蒸馏水冲洗并自然晾干。3.高温消毒:在进行高温消毒之前,确保移液枪能够承受高温。1.移液枪排液不尽,在移液枪吸头顶端会残留少许溶液这种情况往往是由于移液枪的吸头不匹配所造成的,如果吸头口部过大,会降低与移液枪之间的密封性,从而减小内部压强,容易出现吸头脱落、残液、吸液不准等现象。所以,移液枪在使用时务必要选择与之相匹配的枪头以避免吸头不匹配所造成的吸液不准、有残液所造成的无效实验数据。2.在使用移液枪时,吸液量变小,吸液费力出现此状况时,要检查移液器是否有堵塞物的现象,如果出现堵塞,需要及时进行拆枪清洁。移液枪内部固件可能已受污染,为不影响下次实验,建议将内部活塞、吸嘴等一同清洗、消毒。必要时进行灭菌操作。3.在使用移液枪时,吸液量常常超过限定量程这种现象往往是由于量程锁出现故障,无法自行维修,需要及时联系售后相关人员进行检修。4.移液过程中出现移液枪卡顿或退吸头操作困难,多数是因为移液枪内部活塞磨损或润滑不足所造成。有时,移液枪内部浸液也会出现这种情况。如果退吸头臂出现异常或弹簧受损,也会使退吸头过程费力,同时是移液器变得卡顿。蛋白纯化技术交流,请添加我们的微信: