层析技术是生物制药领域中用于蛋白质纯化的关键步骤。然而，在层析过程中，填料可能会因多种原因而沉积色素，这不仅影响填料的外观，还可能导致载量下降和柱效降低，最终影响产品的质量和纯度。因此，研究和开发有效的色素去除方法对于延长层析填料的使用寿命和保证产品质量至关重要。
层析填料中色素的来源
色素的沉积可能来源于多种因素，包括蛋白质的非特异性吸附、细胞培养过程中的代谢副产物、以及层析过程中使用的化学物质等。这些色素的沉积不仅影响填料的性能，还可能对后续的纯化步骤造成干扰。
色素对填料性能的影响
随着介质使用次数的增加，积累的色素可能会导致填料外观颜色变深、载量下降，严重时柱内填料塌陷、板结，影响填料性能与寿命。在必要时，可以去掉部分色素污染严重的填料以恢复填料性能。
去除色素的方法
①疏水作用力结合的色素去除
疏水作用力是蛋白质与填料相互作用的重要方式之一。通过使用高浓度的碱溶液，如0.5~1M NaOH，可以破坏蛋白质结构，从而破坏疏水作用力，有效去除结合在填料上的色素。
②脂类色素的去除
脂类色素的去除可以依据相似相溶原理，使用0.5M非离子去污剂、70%乙醇、30%异丙醇等溶剂处理3~5CV，以达到去除脂类色素的目的。
③沉积的顽固色素去除
对于沉积的顽固色素，可以采用多种试剂混合进行处理。例如，使用0.5M醋酸+8M尿素+1~2M NaCl或1M NaOH+2M NaCl处理5~10CV。在填料可以耐受有机溶剂的情况下，还可以使用1M NaOH+30%异丙醇的方式进行清洗。
色素的种类多样，层析纯化虽然是去除色素最有效的方法之一，但填料的性能也受色素影响。因此，对料液预处理阶段的过滤与澄清，可以很大程度上缓解后续纯化的压力、延长填料的使用寿命。开发新的去除方法，对于提高层析填料的使用寿命和保证产品质量具有重要意义。
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