参考标准值:使用参考值是最直接的方式来确定稀释倍数。这些参考值可能是估算值,也可能是样品标签上提供的数值。对于经验丰富的实验者来说,即使没有参考值,他们也能进行有效的计数。但对于初学者而言,没有参考值可能会让他们感到无所适从。
扩大计数范围:通过扩大稀释范围来增加计数的准确性。例如,可以选择10^-8、10^-7、10^-6等不同稀释梯度,每个梯度使用三个平板进行涂布。对于10^-9、10^-5、10^-4等稀释梯度,每个梯度使用一个平板作为对照。这样,即使某些稀释梯度的菌落数无法准确计数,也能提供一个参考或估算值。
利用光学显微镜:在稀释到10^-8左右时,可以使用单染色法在显微镜下观察样品。如果没有观察到菌落,说明稀释倍数不够,需要增加;如果观察到1~5个菌落,说明稀释倍数合适;如果菌落数量超过5个,需要进一步稀释;如果视野中菌落过多,就需要采取相应的处理措施。
使用血球计数板:在稀释到10^-8左右时,可以使用血球计数板来估计菌落数量,从而推算出菌落总数,判断是否满足计数要求。
样品研磨:即使是液体样品,也需要使用玻璃珠等工具进行研磨,以确保菌落被打散,便于计数。
涂布均匀性:在涂布平板时,应尽量均匀覆盖整个表面。如果涂布不均匀,可以考虑使用倾注法。
稀释工具的选择:在稀释样品时,优先使用试管而不是离心管,以减少样品损失和提高稀释的准确性。
进蛋白纯化技术交流群,请添加我们的微信后邀请进群: