都说一场秋雨一场寒！最近降温降的好厉害呀，听说好些地方都下雪了，我的网络学习搭子们，你们那儿的气温如何呢？
冷空气驾到，“老寒腿”瑟瑟发抖！每到换季的时候，患骨关节炎的同志们真是遭老罪了。根据世界卫生组织的数据，全球骨关节炎患病人数已超过5亿，那么骨关节炎应该怎么研究呢？来看看这篇2个月接收的“神刊”佳作吧！
这是今年10月发表在中医药“神刊”《Journal of Ethnopharmacology》（PS：搞中医药研究的小伙伴们可以关注一下这本期刊哈~）上的研究论文，由安徽中医药大学第二附属医院老年病科等多个研究团队合作完成，通过体内实验、体外实验、网络药理学和单细胞测序等多种方法，揭示了健脾清热通络方（HQC）对骨关节炎（OA）的缓解作用及其潜在机制。话不多说，接下来咱们就开始进入今天的主题，一起来研读这篇文章吧~
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l题目：健脾清热通络方通过调控 STAG1/TP53/P21 信号通路缓解衰老相关分泌表型与骨关节炎
l杂志：Journal of Ethnopharmacology
l影响因子：4.8
l发表时间：2025年1月
（注：公众号后台回复“123”获取文献全文！文献编号：20241119）
研究背景
骨关节炎（OA）是一种常见关节疾病，目前治疗选择有限。本文旨在研究健脾清热通络方（HQC）对OA的作用，其由五味中药组成，长期临床应用显示可改善OA患者关节症状，但具体分子机制不明。
研究思路
1. 体内实验
选用雄性Sprague - Dawley大鼠，随机分组，通过MIA注射建立OA模型，建模后给予不同处理，测量关节肿胀，进行组织染色和评分，检测血清炎症因子，评估药物疗效。
2. 体外实验
培养原代软骨细胞，用 IL - 1β刺激模拟 OA，分组进行不同干预。运用 CCK - 8 检测细胞活力，流式细胞术分析细胞凋亡，免疫荧光染色观察相关蛋白表达，RT - qPCR 和 WB 测定基因及蛋白表达变化。
3. 网络药理学与转录组学分析
- 活性成分与靶点预测：从TCMSP数据库获取HQC活性成分和靶点，进行GO、KEGG、DO富集分析。
- 关键靶点与通路确定：分析OA临床转录组数据，进行WGCNA，构建PPI网络，识别关键簇，结合单细胞RNA测序数据，确定HQC治疗OA的关键靶点和通路。
主要结果
1、HQC改善OA大鼠关节状况
HQC 治疗显著降低 OA 大鼠关节肿胀，改善软骨组织病理特征，使 OARSI 和 Mankin 评分降低，效果优于葡萄糖胺组，缓解了 MIA 诱导的软骨退变等问题。
图1 HQC 对 OA 大鼠膝关节软骨损伤的改善
2、HQC 调节软骨细胞相关指标
在 OA 大鼠软骨组织中，HQC 有效逆转基质降解和凋亡相关指标变化，调节炎症因子水平。体外实验中，确定其对软骨细胞的非毒性剂量范围，能提高细胞活力，降低凋亡率。
图2 显示了对软骨细胞活力的影响。
3、OA疾病靶点及HQC活性成分预测
依据筛选参数从TCMSP数据库确定90种HQC活性成分，涉及多种中药，删除重复后得262个假想靶点，GO、KEGG、DO分析显示其生物活性类别、通路及作用疾病。通过转录组学分析GSE98918数据集，确定OA相关差异表达基因，GSEA表明炎症、衰老和软骨分化是OA发病关键因素。
图3 GSE98918 收集的HQC靶点功能富集及差异基因表达
4、HQC作用于OA的关键deg及通路的鉴定
使用R程序WGCNA包对GSE98918数据建模构建无标度共表达网络，确定软阈值和关键基因模块，分析模块与OA相关性，确定medarkolivegree模块。筛选出OA相关基因、关键基因交集，构建PPI网络并识别关键簇，KEGG和GO分析显示关键靶点主要集中于p53等信号通路。
图4关键聚类的识别与功能分析
5、单细胞RNA测序数据验证关键簇表达和药物分布
对单细胞测序数据进行分析，确定聚类树分辨率等，将细胞聚类并注释为四种类型，发现HQC主要作用于软骨细胞簇，计算关键簇表达差异，筛选出4个候选靶点（STAG1、TP53、P21、P16），ROC曲线显示其对OA有较好恢复能力且在OA中表达上调。
图5 确定HQC对OA的关键靶点
6、HQC调控与STAG1/TP53/P21信号转导轴相关的OA软骨细胞衰老相关分泌表型
为探究HQC对软骨细胞保护作用与STAG1/TP53/P21信号轴关系，将STAG1过表达质粒转染软骨细胞，发现相关炎症因子、凋亡率及蛋白表达改变，免疫荧光和免疫组化显示特定变化，表明HQC通过调节该信号轴发挥软骨保护等作用。
图6 免疫组化分析HQC对大鼠软骨组织STAG1、TP53、536、P21、P16表达的影响
文章小结
本研究综合网络药理学分析与实验研究，证实 HQC 可经调节 STAG1/TP53/P21 信号通路缓解骨关节炎（OA），为中医药干预 OA 开拓了新路径，也为后续临床实践给予了理论支撑。整个研究逻辑连贯，层层递进，干湿结合的方式让研究内容充实且具有可信度。在中医药蓬勃发展的当下，中医药领域的小伙伴们可要把握机遇，借助生信技术加速研究进程，早日产出成果！想复现思路的朋友快来联系生信湾吧！
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