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引用本文
张峥,梁悦,唐恩琪,周小茜,胡永红,陈高峰,刘伟,慕永平,刘平,陈佳美.扶正化瘀方抗小鼠胆汁淤积性肝纤维化的作用机制研究[J]. 中华肝脏病杂志,2024, 网络预发表.
DOI:10.3760/cma.j.cn501113-20240815-00375
摘 要
目的
探讨扶正化瘀方（FZHY）对小鼠胆汁淤积性肝纤维化的干预作用及其部分效应机制。
方法
将Mdr2基因敲除（Mdr2 -/-）小鼠随机分为模型组、FZHY组、奥贝胆酸组。同周龄野生型C57BL/6J小鼠作为对照组。Mdr2 -/-小鼠9周龄首日起，各用药组予以相应药物灌胃；对照组和模型组予0.3%羧甲基纤维素钠灌胃，12周龄末处死取材。高速生物化学分析仪检测小鼠血清碱性磷酸酶和丙氨酸氨基转移酶活性；苏木精-伊红染色、天狼猩红染色法观察肝组织病理变化；羟脯氨酸含量测定法检测肝组织胶原情况；免疫组织化学染色，蛋白免疫印迹法、实时荧光定量聚合酶链式反应法分别检测肝组织纤维化指标Col-Ⅰ和α-平滑肌肌动蛋白的表达；胆管反应标志物Epcam、CK7和CK19以及Pcna、Mki67和Ccnd1的表达；炎症相关因子Ccl2、Ccl5、Tnf-α、Il10和Cxcl4的表达；以及过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）α和核因子（NF）- κB磷酸化的表达情况。多组间比较采用单因素方差分析；组间比较采用LSD法。采用双侧统计检验。
结果
与野生型小鼠比较，Mdr2 -/-小鼠血清丙氨酸氨基转移酶和碱性磷酸酶活性显着升高（P<0.001）；肝组织天狼猩红阳性染色面积百分比和羟脯氨酸含量显着升高（P<0.01）；肝组织Col-Ⅰ、α-平滑肌肌动蛋白；Epcam、CK7、CK19、Pcna、Mki67和Ccnd1的表达；Ccl2、Ccl5、Tnf-α、Il10和Cxcl4的表达显着增加（P<0.01）；而FZHY和奥贝胆酸干预后均能显着逆转这些指标的升高（P<0.05；P<0.01）。进一步研究结果显示，与野生型小鼠比较， Mdr2 -/-小鼠肝组织PPARα的表达显着降低；NF-κB磷酸化显着增强（P<0.01）；而与Mdr2 -/-小鼠比较，FZHY组小鼠肝组织PPARα的表达显着增加（P<0.05）；NF-κB磷酸化被显着抑制（P<0.05）。P <0.001）；肝组织天狼猩红阳性染色面积百分比和羟脯氨酸含量显着升高（P<0.01）；肝组织Col-Ⅰ、α-平滑肌肌动蛋白；Epcam、CK7、CK19、Pcna、 Mki67和Ccnd1的表达；Ccl2、Ccl5、Tnf-α、Il10和Cxcl4的表达显着增加（P<0.01）；而FZHY和奥贝胆酸干预后均能显着逆转这些指标的升高（P<0.05； P<0.01）。进一步研究结果显示，与野生型小鼠比较， Mdr2 -/-小鼠肝组织PPARα的表达显着降低；NF-κB磷酸化显着增强（P<0.01）；而与Mdr2 -/-小鼠比较，FZHY组小鼠肝组织PPARα的表达显着增加（P<0.05）；NF-κB磷酸化被显着抑制（P<0.05）。
结论
FZHY可显着改善Mdr2 -/-自发性胆汁淤积性肝纤维化小鼠肝脏的纤维化、胆管反应和炎症，其作用机制与调控PPARα/NF-κB通路有关。
正 文
胆汁淤积性肝纤维化是因肝细胞或毛细胆管中胆汁合成、分泌和排泄异常，肝内或肝外胆管阻塞，诱发持续性胆汁淤积、胆管渐进性破坏所致的肝脏炎症和纤维化，甚则导致肝硬化、肝衰竭等［ 1 ］ 。临床以原发性胆汁性胆管炎和原发性硬化性胆管炎最为常见。胆汁淤积性肝纤维化可显着增加胆管癌和结直肠癌的风险。熊去氧胆酸或奥贝胆酸（obeticholic acid，OCA）等药物治疗面临着应答不完全、瘙痒等不良反应以及经济负担重等问题［ 2 , 3 ］ 。因此，探索胆汁淤积性肝纤维化的有效治疗手段具有重要的临床意义和社会需求。扶正化瘀方（Fuzheng hua yu，FZHY）在临床上广泛用于治疗各种慢性肝病引起的肝纤维化和肝硬化，具有改善血清肝脏生物化学指标、肝脏病理组织学、肝纤维化相关的血清学指标，降低肝脏硬度值、门静脉高压，降低肝硬化的肝癌发生率和病死率等作用［ 4 ］ 。然而，FZHY对胆汁淤积性肝纤维化的研究报道较少。因此，本研究旨在探讨FZHY对小鼠胆汁淤积性肝纤维化的干预作用及其部分效应机制。
一、材料与方法
1. 实验动物：SPF级C57BL/6J雄性小鼠，SPF级雄性多药耐药基因2（multidrug resistance gene 2，Mdr2）基因敲除（Mdr2 -/-）小鼠，22～24 g，均采购自赛业模式生物研究中心（太仓）有限公司，许可证：SCXK（苏）2018-0003。饲养于上海中医药大学动物实验中心，恒温恒湿，日夜交替，小鼠自由饮食饮水。本研究通过上海中医药大学实验动物伦理委员会批准（批准号：PZSHUTCM2403140003）。
2.实验试剂：FZHY浸膏粉（批号：180206）由上海黄海制药有限责任公司提供；OCA（批号：MB6084）购自大连美仑生物技术有限公司；羟脯氨酸含量检测试剂盒（碱水解法） （货号：A030-2-1）、无毒环保苏木精-伊红（haematoxylin-eosin staining，HE）染液（货号：D006-1-3）购自南京建成生物工程研究所；免疫组织化学显色试剂（货号：GK500705/50次）购自基因科技（上海）股份有限公司；中性树胶（货号：10004160）购自国药集团化学试剂有限公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）（货号：P0009）、RIPA裂解液（强）（货号：P0013B）、QuickBlockTMWertern第一抗体稀释液（货号：P0256-500 ml）、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合液（货号：P1050）均购自上海碧云天生物技术有限公司；总RNA提取试剂（货号：BS258A）购自兰杰柯科技有限公司；定量PCR专用反转录试剂盒（货号：RR047A）、定量PCR试剂盒TB Green® Premix Ex Taq™（货号：RR420A）均购自日本TaKaRa生物公司；油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）、Ⅰ型胶原蛋白a1（collagen type 1a1，Col1a1）、α-平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscle actin，α-SMA）、上皮细胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule，Epcam）、细胞角蛋白7（cytokeratin-7，CK7）、CK19、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、细胞核增殖抗原67（Mki67）、细胞周期素D1（cyclinD1，Ccnd1）、过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisomeproliferators-activatedreceptor-α，PPARα）、趋化因子配体2（chemokine ligand 2，Ccl2）、Ccl5、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor， Tnf-α）、白介素10（interleukin 10，Il10）、CXC基元趋化因子4（CXC motif chemokine ligand 4，Cxcl4）引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列见表1 。 α-SMA抗体（货号：ab124964）、Col-Ⅰ抗体（货号：ab270993）、Epcam抗体（货号：ab71916）、PPARα抗体（货号：ab215270）均购自英国abcam公司；CK7抗体（货号：15539-1 -AP）、CK19抗体（货号：10712-1-AP）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗体（货号：60004-1-Ig）均购自美国Proteintech公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG（H+L）抗体（货号：A0208）、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（H+L）抗体（货号：A0216）均购自上海碧云天生物技术有限公司；核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）抗体（货号：8242）、磷酸化NF-κB（phosphorylating NF-κB，p-NF-κB）抗体（货号：3033）均购自美国CST公司。 。 α-SMA抗体（货号：ab124964）、Col-Ⅰ抗体（货号：ab270993）、Epcam抗体（货号：ab71916）、PPARα抗体（货号：ab215270）均购自英国abcam公司；CK7抗体（货号：15539-1-AP）、CK19抗体（货号：10712-1-AP）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，GAPDH）抗体（货号：60004-1-Ig）均购自美国Proteintech公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG（H+L）抗体（货号：A0208）、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（H+L）抗体（货号：A0216）均购自上海碧云天生物技术有限公司；核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）抗体（货号：8242）、磷酸化NF-κB（phosphorylating NF-κB，p-NF-κB）抗体（货号： 3033）均购自美国CST公司。 。 α-SMA抗体（货号：ab124964）、Col-Ⅰ抗体（货号：ab270993）、Epcam抗体（货号：ab71916）、PPARα抗体（货号：ab215270）均购自英国abcam公司；CK7抗体（货号：15539-1 -AP）、CK19抗体（货号：10712-1-AP）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗体（货号：60004-1-Ig）均购自美国Proteintech公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG（H+L）抗体（货号：A0208）、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（H+L）抗体（货号：A0216）均购自上海碧云天生物技术有限公司；核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）抗体（货号：8242）、磷酸化NF-κB（phosphorylating NF-κB，p-NF-κB）抗体（货号：3033）均购自美国CST公司。 NF-κB，p-NF-κB）抗体（货号：3033）均购自美国CST公司。 。α-SMA抗体（货号：ab124964）、Col-Ⅰ抗体（货号：ab270993）、Epcam抗体（货号：ab71916）、PPARα抗体（货号：ab215270）均购自英国abcam公司；CK7抗体（货号：15539-1 -AP）、CK19抗体（货号：10712-1-AP）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗体（货号：60004-1-Ig）均购自美国Proteintech公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG（H+L）抗体（货号：A0208）、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（H+L）抗体（货号：A0216）均购自上海碧云天生物技术有限公司；核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）抗体（货号：8242）、磷酸化NF-κB（phosphorylating NF-κB，p-NF-κB）抗体（货号：3033）均购自美国CST公司。 NF-κB，p-NF-κB）抗体（货号：3033）均购自美国CST公司。 。 α-SMA抗体（货号：ab124964）、Col-Ⅰ抗体（货号：ab270993）、Epcam抗体（货号：ab71916）、PPARα抗体（货号：ab215270）均购自英国abcam公司；CK7抗体（货号：15539-1 -AP）、CK19抗体（货号：10712-1-AP）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗体（货号：60004-1-Ig）均购自美国Proteintech公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG（H+L）抗体（货号：A0208）、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（H+L）抗体（货号：A0216）均购自上海碧云天生物技术有限公司；核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）抗体（货号：8242）、磷酸化NF-κB（phosphorylatingNF-κB，p-NF-κB）抗体（货号：3033）均购自美国CST公司。 kappa-B，NF-κB）抗体（货号：8242）、磷酸化NF-κB（phosphorylating NF-κB，p-NF-κB）抗体（货号：3033）均购自美国CST公司。 kappa-B，NF-κB）抗体（货号：8242）、磷酸化NF-κB（phosphorylating NF-κB，p-NF-κB）抗体（货号：3033）均购自美国CST公司。
3. 实验分组与给药：Mdr2 -/-小鼠自由饮食饲养至8周末，按随机数字表法分为模型组（Mdr2 -/-组，n =6）、扶正化瘀组（FZHY组， 4 mg/kg ［ 5 ］，n =6）、奥贝胆酸组（OCA组，10 mg/kg ［ 6 ］，n =6）。同周龄C57BL/6J小鼠作为野生对照组（WT组，n =6）。小鼠9周龄首日起，各用药组予以相应药物灌胃；对照组和模型组予0.3%羧甲基纤维素钠灌胃，1次/d，连续给药4周，12周龄末处死取材（见图1A ）。
4. 动物取材：小鼠予5%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，开腹后腹主动脉采血，血液静置3 h后，于4 ℃条件下，3 500 r/min离心15 min。抽取血清用高速生物化学分析仪检测ALP和ALT活性。沿腹后壁摘取完整肝脏，留取肝组织标本于4%甲醛固定液中固定，剩余肝组织-80 ℃冷冻保存。
5. 肝组织羟脯氨酸含量测定：按试剂盒说明书操作步骤测定。
6. 肝组织HE染色：石蜡切片烤片溶蜡，脱蜡脱水后，苏木素染核，盐酸乙醇分化，伊红复染细胞质，中性树胶封片。 48 h后用KFBIO数字病理扫描仪扫片获取病理图像。
7．肝组织天狼猩红染色：石蜡切片脱蜡至水，滴加天狼猩红染液染色，无水乙醇分化，二甲苯透明，中性树胶封片。扫片获取病理图像，并使用Leica SCN400数字病理信息扫描软件计算胶原染色面积比。
8. 肝组织免疫组织化学染色：石蜡切片脱蜡至水后磷酸盐缓冲液漂洗5 min，柠檬酸钠缓冲液或Tris-EDTA缓冲液100 ℃沸煮30 min并自然冷却进行抗原修复。继而用0.3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，10%山羊血清阻断非特异性结合位点，滴加相应的第一抗体4 ℃孵育过夜。次日片子置于37 ℃复温30 min，滴加第二抗体37 ℃孵育30 min，显微镜下DAB显色。最后苏木精染核，中性树胶封片后扫片观察。
9.实时荧光定量PCR（quantitative real-time fluorescence PCR，qRT-PCR）实验：Trizol法提取肝组织总RNA，借助NanVue浓度检测仪测定总RNA浓度。依据Takara逆转录和扩增试剂盒说明书合成cDNA，并以Gapdh为参照进行检测，计算基因相对表达水平，小鼠引物序列见表1 。
10. 免疫印迹法实验：RIPA溶液法提取肝组织总蛋白，依据BCA试剂盒说明书检测蛋白浓度，调整蛋白含量制备蛋白样本。使用SDS-PAGE电泳分离蛋白后将蛋白转移至PVDF膜上，5% BSA室温封闭，加第一抗体4 ℃孵育过夜。次日PBST清洗后第二抗体室温孵育1 h，借助全自动化学发光荧光分析系统ECL发光扫膜，并使用image J软件分析蛋白条带灰度值。
11. 统计学方法：采用SPSS 26.0统计软件分析数据，借助Graphpad软件制作统计图表。计量资料以x¯ ± s表示，多组间比较采用单因素方差分析；组间比较采用LSD法。采用双侧统计检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
二、结果
1. FZHY方对Mdr2 -/-胆汁淤积性肝纤维化小鼠肝脏损伤程度的影响：血生物化学检测结果显示，与野生对照组小鼠比较，Mdr2 -/-小鼠血清ALT和ALP活性显着升高（P <0.001）；与Mdr2 -/-小鼠比较，FZHY组和OCA组小鼠血清ALT和ALP活性显着降低（P <0.05；P <0.01）（ 图1B 和1C ）。 HE染色显示，Mdr2 -/-小鼠肝组织大量胆管细胞增生，汇管区炎性细胞聚集；与Mdr2 -/-小鼠比较，FZHY组和OCA组小鼠胆管细胞增生及炎性细胞聚集显着减少（ 图1D ）。
2. FZHY方对Mdr2 -/-胆汁淤积性肝纤维化小鼠肝纤维化程度的影响：天狼猩红染色结果显示，与野生对照组比较， Mdr2 -/-小鼠肝组织中胶原沉积显着增加，FZHY组和OCA组小鼠肝组织中胶原沉积显着减少（ 图2A ）。天狼猩红全片阳染面积半定量分析和羟脯氨酸结果显示，与野生对照组比较， Mdr2 -/-小鼠肝组织天狼猩红阳性染色面积百分比和羟脯氨酸含量显着升高（P<0.01）；与Mdr2 -/-小鼠比较，FZHY组和OCA组小鼠肝组织天狼猩红阳性染色面积百分比和Hyp含量显着降低（P<0.05； P<0.01）（ 图2B 和2C ） 。 Col-Ⅰ的免疫组织化学和qRT-PCR结果显示，FZHY和OCA可显着减少Mdr2 -/-小鼠肝组织Col-Ⅰ的表达（ P<0.05； P<0.01）（ 图2A 和2D ）；进一步研究发现，FZHY和OCA还可显着减少Mdr2 -/-小鼠肝组织α-SMA的mRNA和蛋白的表达（ P<0.05； P<0.01）（ 图2A 和2E -F）。提示FZHY可显着减轻Mdr2 -/-小鼠肝脏纤维化程度。
3. FZHY方对Mdr2 -/-胆汁淤积性肝纤维化小鼠肝脏胆管反应的影响：免疫组织化学染色结果显示，与野生对照组比较，Mdr2 -/-小鼠肝组织中胆管反应标志物Epcam 、CK7和CK19的阳性染色显着增多；与Mdr2 -/-小鼠比较，FZHY组和OCA组肝组织Epcam、CK7和CK19的阳性染色显着减少（ 图3A ）；qRT-PCR也显示同样的结果， FZHY和OCA均可显着降低Mdr2 -/-小鼠肝组织Epcam、 Ck7和Ck19的表达（P <0.05；P <0.01）（图3B -D）；且western blot结果显示，与Mdr2 - /-小鼠比较，FZHY组和OCA组小鼠肝组织CK19蛋白表达显着降低（P <0.05；P <0.01）（ 图3E ）。进一步研究发现，FZHY和OCA还可显着降低Mdr2 -/-小鼠肝组织Pcna、 Mki67和Ccnd1的mRNA表达（P <0.01）（ 图3F -H）。提示FZHY可显着抑制Mdr2 -/-小鼠肝脏胆管反应。
4. FZHY方对Mdr2 -/-胆汁淤积性肝纤维化小鼠肝组织PPARα信号通路的影响：与野生对照组比较，Mdr2 -/-小鼠肝组织中PPARα的mRNA和蛋白表达显着降低（P <0.05）；NF-κB磷酸化蛋白显着增加（P <0.01）；而FZHY可显着上调Mdr2 -/-小鼠肝组织中PPARα的mRNA和蛋白表达（P <0.05）（见图4A -C） ，并显着降低NF-κB磷酸化蛋白的表达（P <0.05）（见图4D ）。且FZHY还可显着逆转Mdr2 -/-小鼠肝组织Ccl2、 Ccl5、 Tnf- α、 Il10和Cxcl4的升高（P <0.05；P <0.01）（ 图4E 和4F ）。提示FZHY可显着抑制Mdr2 -/-小鼠肝脏炎症反应，且与调控PPARα/NF-κB通路有关。
三、讨论
Mdr2 -/-小鼠由于体内胆小管磷脂转运体被靶向破坏，可自发导致胆汁淤积，残留的胆汁损伤胆管细胞导致胆管周围炎性细胞聚集和胶原沉积［ 7 ］ 。Mdr2 -/-小鼠是目前研究胆汁淤积性肝纤维化的公认动物模型，能再现胆汁淤积性肝纤维化的主要组织病理学特征，如肝组织炎症浸润、胆管反应和纤维化，并伴有血清ALT、天门冬氨酸氨基转移酶和胆汁淤积参数ALP等水平的升高。我们的研究发现Mdr2 -/-小鼠给予FZHY干预后可显着降低小鼠血清ALT和ALP活性；降低肝组织纤维化指标天狼猩红阳性染色面积、羟脯氨酸含量、Col-Ⅰ和α - SMA的表达；降低肝组织胆管反应标志物Epcam、CK7和CK19的表达；降低炎症相关因子Ccl2、Ccl5、Tnf-α、Il10和Cxcl4的表达，提示FZHY可显着改善Mdr2 -/-自发性胆汁淤积性肝纤维化小鼠肝脏的纤维化、胆管反应和炎症。
FZHY是经中国国家食品药品监督管理局批准的用于治疗肝纤维化的中药复方制剂，由丹参、桃仁、五味子、虫草菌丝、绞股蓝和松花粉6味中药组成。大量的临床试验证实FZHY具有显着的抗病毒性肝纤维化作用［ 8 ， 9 ］ 。然而关于FZHY对胆汁淤积性肝纤维化的疗效报道甚少。本研究采用Mdr2 -/-自发性胆汁淤积性肝纤维化小鼠模型证实FZHY可显着改善胆汁淤积性肝纤维化小鼠肝脏的纤维化、胆管反应和炎症。
PPAR是一种配体激活型转录受体，是体内参与调节多种胆汁淤积的重要核受体，可通过抑制胆汁酸合成、降低胆汁酸毒性、调控胆汁酸代谢酶以及转运蛋白的表达改善肝内胆汁淤积，并发挥抗炎、抗氧化和抗肝纤维化作用［ 10 ］ 。目前已知的PPAR包括三种亚型，PPARα、PPARβ／δ和PPARγ，其中PPARα在肝脏中高度表达。研究报道PPARα不仅参与调节肝脏中脂肪酸氧化代谢途径［ 11 ］ 、胆汁酸合成与代谢［ 12 ］ ；还在啮齿类动物的脂蛋白合成、炎症反应［ 13 ］ 和肝癌发生中［ 14 ］ 发挥重要作用。 PPARα配体可有效抑制NF-κB亚基p65的迁移降低c-Jun亚基AP-1的磷酸化水平，进而降低IL1、TNF-α、Cox-2和iNOS等促炎细胞因子的水平抑制炎症反应［ 15 ］ ；相反，PPARα缺失导致巨噬细胞中丝裂原活化蛋白激酶磷酸化增加，激活NF-κB促进炎症反应［ 16 ］ 。一项回顾性研究显示给对熊去氧胆酸应答不完全的原发性胆汁性胆管炎和原发性硬化性胆管炎患者增加PPARa激动剂非诺贝特治疗，可显着降低患者血清ALP 、天门冬氨酸氨基转移酶、ALT、总胆红素以及血清中炎症因子和趋化因子水平，改善胆汁酸代谢［ 17 ］ 。一项随机、双盲、安慰剂对照临床试验显示，苯扎贝特可显着改善胆汁淤积性肝病患者的中重度瘙痒，且显着降低血清ALP水平［ 18 ］ 。此外，一项关于苯扎贝特对原发性胆汁性胆管炎患者长期预后的疗效观察发现，与单独使用熊去氧胆酸比较，苯扎贝特联合熊去氧胆酸可有效降低全因死亡率、肝脏相关死亡率以及肝移植需求的风险［ 19 ］ 。因此靶向激活PPARα的有效药物是一种有前景的抗胆汁淤积性肝纤维化的治疗策略。
研究报道，PPARα可促进Mdr2表达，编码胆小管磷脂转运体进而促进低磷脂有毒胆汁酸的排泄［ 20 ］ ；而Mdr2 -/-小鼠肝组织PPARα的表达显着减少。本研究发现Mdr2 -/-小鼠给予FZHY干预后，肝组织PPARα的表达显着上调，NF-κB的磷酸化显着被抑制；提示FZHY抗胆汁淤积性肝纤维化的作用与调控PPARα/NF-κB通路有关。但FZHY如何调控PPARα/NF-κB通路，以及FZHY中什么成分通过调控PPARα/NF-κB通路发挥抗胆汁淤积性肝纤维化的作用仍未明确，有待于今后进一步深入研究。本研究发现为FZHY用于胆汁淤积性肝纤维化的临床开发应用提供部分科学依据。
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