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艰难梭菌是医院感染性腹泻的主要病原菌,艰难梭菌感染(CDI)具有复发率高、耐药率高、难治率高、病死率高、医疗费用高等特点。因此,尽早快速检测艰难梭菌毒素,尽早识别CDI,对其诊疗与预防具有重要意义。由于缺乏最佳的实验室检测方法,艰难梭菌感染(CDI)的诊断具有挑战性。在卫生保健相关腹泻或任何原因不明的腹泻患者中,应系统地检测艰难梭菌及其毒素。关于CDI检测方法,一起来了解一下吧!
CDI 的诊断依赖于以下两种方法中的一种:证明存在导致 CDI 临床表现的毒素,或证明存在能够产生毒素的艰难梭菌,即产毒艰难梭菌。检测粪便中毒素的参考检测是细胞毒性中和试验(CCNA),产毒艰难梭菌检测的参考检测是产毒素培养(TC)。通过CCNA检测体外毒素产生,通过酶免疫分析(EIAs)检测毒素A/B,或通过核酸扩增试验(NAAT)检测产生毒素基因,评估产毒潜力。
TC无法区分无症状携带产毒艰难梭菌菌株和CDI。虽然CCNA可以更好地反映真实的CDI,但由于缺乏标准化和粪便储存或收集条件不理想,因此可能产生假阴性结果。
快速检测适合临床应用,主要包括谷氨酸脱氢酶(GDH)EIAs,毒素A/B EIAs以及毒素基因核酸扩增试验(NAATs)。
毒素A/B EIAs直接检测粪便中的游离毒素,被认为与临床症状相关,但其灵敏度不是最优的,也高度依赖于检测样本的储存时间和储存温度。GDH EIAs 检测谷氨酸脱氢酶(一种由产毒和非产毒艰难梭菌菌株产生的酶),具有高度敏感性,但不能区分毒性菌株和非毒性菌株,因此特异性较低,可作为诊断前的筛选手段,确定哪些样品应进行毒素A/B EIAs 或毒素的核酸检测。快速 GDH 测定可用于排除CDI,从而减少患者隔离时间,需要注意的是,其他引起腹泻的感染性原因也可能需要隔离。NAATs包括PCR检测、解旋酶依赖性扩增检测和环介导等温扩增检测。NAATs具有敏感性,且由于只检测有毒菌株而不是所有艰难梭菌,因此比GDH EIAs更具特异性。由于NAATs仅检测毒素基因的存在,因此只能检测艰难梭菌的毒素产生能力。除了CDI病例外,NAATs还会检测出无症状的产毒艰难梭菌携带者。
目前,尚无指南指出某种单一检测方法可以用于诊断 CDI。一些CDI 指南通常建议采用多步检测法,以最大限度地提高诊断准确性。CDI 检测应包括高灵敏度和高特异性的检测方式。三步检测法首先使用GDH试验初筛,GDH阳性进行毒素 EIAs,二者结果不一致使用细胞毒性试验(CCTA)、TC或NAATs确证。两步检测法同步联合检测GDH和毒素EIAs试验,二者结果不一致使用CCTA、TC或NAATs确证。
CDI 的检测只应在未成形的粪便中进行,因为临床症状的出现是诊断 CDI 的先决条件。但很难评估哪些未成形的粪便应该进行检测,因此,对所有提交的未成形粪便样本进行检测已得到欧洲临床微生物与感染性疾病学会(ESCMID)指南认可。对于因 CDI 导致肠梗阻的患者,检测 CDI 可使用成形粪便或直肠拭子。
无症状艰难梭菌肠道携带最常见于新生儿和幼儿,不建议在该组人群中进行艰难梭菌常规检测。根据美国儿科学会(AAP)指南,应避免对1岁以下儿童进行 CDI 常规检测。对于1-3岁的腹泻儿童,可以考虑进行 CDI 检测,但建议首先检测其他原因,特别是病毒感染。对于3岁以上的儿童,可以遵循正常的检测程序。
在非疫情情况下,毒素A/B EIAs和NAAT重复检测的诊出率低,不建议在7天内重复检测。但在 CDI 流行的情况下或在临床怀疑程度较高的患者中,重复检测可能是有价值的。
参考资料:
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