研究进展：细胞外囊泡（EVs）是一种很有前途的疾病诊断的无创生物标志物的来源，具有磷脂双层的小颗粒，携带核酸、蛋白质和代谢物，由细胞自然分泌，在调节免疫反应、疾病发病机制以及癌症生物学等生物过程中发挥着关键作用，EV中携带的疾病相关生物分子，可以激活信号转导途径，诱导受体细胞的细胞改变，从而调节疾病的发展。从生物液体中分离EV可以通过如超离心、聚合物沉淀和尺寸排除色谱等方法实现。随后使用凝胶电泳、流式细胞术和质谱等技术分析其所含物质。然而，大量的EV和其他非EV颗粒的共存会使分类工作复杂化。对从体液中纯化和特异性分离EV或脂蛋白提出了相当大的挑战。此外，含有高丰度异质蛋白的EV样本很难通过蛋白质组学等非靶向检测策略进行检测。生物液体中EV的低水平是检测和捕获方法的关键限制，特别是在处理大量临床样本时；这些限制阻碍了生物液体中EV的有效检测和分析。解决方案：为了解决以上问题，作者开发了一种两亲性-树枝状大分子超分子探针（ADSP）作为亲和矩阵。ADSP由两性霉素B（AMB）分子功能化的高度支链球状树状大分子组成。AMB的多烯结构插入EV的脂质相，通过范德华力和其他分子间力与脂质和固醇相互作用，形成自组装的超分子结构。树突状分子主链允许多个AMB分子与EV相互作用，促进多价EV捕获。将EV捕获到ADSP阵列后，用荧光抗体探测EV，以测量EV表面蛋白的相对表达，随后使用纳米颗粒跟踪分析（NTA）和纳米流细胞术等标准方法进行洗脱和表征。ADSP阵列平台使用了化学技术此外，通过集成自动移液工作站和孔印迹装置，可以实现广泛的生物样本的高通量样本分析，使该平台兼容大量样本的临床测试。除了捕获EV外，该平台还可通过探测翻译后修饰（PTM）功能组来检测EV中的PTMs水平。![]()
图1：第一阶段：ADSP的合成，并将ADSP涂覆在NC膜上；第二阶段：使用ADSP阵列从血浆、尿液或细胞培养基中捕获ev的示意图；第三阶段：使用单一抗体或双抗体对EV蛋白进行免疫印迹，以进行比较表达分析。
结论：总之，本工作介绍了一种方法来促进从微量样品中进行EV的高通量分析，将两亲性树枝状大分子超分子探针（ADSP）涂覆在硝化纤维素膜上，用于阵列捕获，实现了原位免疫印迹分析。并进一步演使用分析由代谢标记引入的叠氮化物基团的特殊糖基化。在该方案中，ADSP的合成和ADSP硝化纤维素膜阵列的制造可以在同一天完成。通过30分钟的孵育，从生物或临床样本中有效捕获EV，然后在3小时窗口内进行免疫印迹分析，从而为EV分离和EV蛋白及其修饰的原位靶向分析提供了一个高通量平台。参考文献： Feng X, Shen A, Zhang W, et al. High-throughput
capture and in situ protein analysis of extracellular vesicles by chemical
probe-based array. Nature protocols, 2024, DOI：10.1038/s41596-024-01082-z.
