本研究利用乙酸乙酯法分离提取了蜂王浆中的蛋白质和脂肪酸,分别通过体内和体外实验分析这两种主要成分的类激素调节作用,为后续高附加值产品开发提供依据。主要研究内容和结果如下:
(1)评估蜂王浆及其提取物中10-羟基-2-癸烯含量以评价实验样品的质量。结果显示,蜂王浆冻干粉中的10-羟基-2-癸烯酸含量为4.61±0.14;蛋白质提取物中的10-羟基-2-癸烯酸含量显著降低(1.28±0.06),脂肪酸提取物中的10-羟基-2-癸烯酸含量显著提高(8.10±0.22)。
(2)薄型子宫内膜主要由雌激素分泌不足导致,蜂王浆是否能调节并改善薄型子宫内膜机体症状尚无研究报道。实验以95%乙醇注射大鼠子宫腔造成薄型子宫内膜模型,分别灌胃蜂王浆、蛋白质提取物或脂肪酸提取物(500 mg/kg/d),探究蜂王浆及其提取物对大鼠行为学、子宫组织、激素分泌及血管生长相关因子的影响。结果显示,95%乙醇处理后的大鼠子宫内膜厚度、腺体数、血管数显著低于对照组,表明模型大鼠的成功建立;蜂王浆及其提取物灌胃处理后,显著增加了薄型子宫内膜大鼠容受性相关因子的表达量,其中脂肪酸提取物的效果优于蛋白质提取物。
(3)雌激素作用是配体通过激活雌激素受体产生,乳腺癌(MCF-7)细胞为雌激素受体阳性表达细胞,依赖雌激素生长。因此,本研究选择MCF-7细胞,旨在探究蜂王浆中的蛋白质和脂肪酸对MCF-7细胞的生长和雌激素受体表达的影响。将蜂王浆及其提取物作用于MCF-7细胞,通过细胞增殖实验得出0.9mg/mL蜂王浆、0.8mg/mL蛋白质提取物、0.7mg/mL脂肪酸提取物对MCF-7细胞具有最大增殖作用,并以该剂量作用于MCF-7细胞后,各组均增加了 MCF-7细胞G1期,降低了S期和G2期的细胞数,增加了 MCF-7细胞的凋亡率。添加蛋白质提取物组和脂肪酸提取物组雌激素受体(ER)α的表达量显著上升,与蛋白质提取物组和脂肪酸提取物组相比蜂王浆组ERα的表达量显著下降。
值得注意的是,蜂王浆组和蛋白质提取物组ERβ表达量较对照组显著上升,而较脂肪酸提取物组显著下降,表明脂肪酸提取物可能是发挥类雌激素样作用的主要物质,蜂王浆及其蛋白质和脂肪酸提取物通过调节雌激素受体而表现出类雌激素样作用。
综上所述,灌胃蜂王浆及其提取物能调控薄型子宫内膜大鼠的子宫内膜容受性相关因子表达水平,加快了 MCF-7细胞的凋亡,增加细胞雌激素受体的表达量,表明蜂王浆可能具有类雌激素样作用,而其中的脂肪酸成分可能是发挥功能的主要物质。