Coolaber
单杂互作验证对照组设置
Part.1
通用阴性和阳性对照
以Y1Hgold-pAbAi系统为例,Y1HGold[p53-AbAi+pGADT7-p53]作为通用阳性对照,在AbA浓度超过800 ng/mL的培养基上,依然可以生长。Y1HGold[p53-AbAi+pGADT7]作为通用阴性对照,100-300 ng/mL的AbA可以抑制生长。在互作验证实验中,如果通用阴性和阳性对照生长异常,可能是实验试剂或操作步骤存在问题,可以从培养基或者AbA浓度上排查原因。如果通用阴性或阳性对照生长生长正常,说明实验组的结果是真实可靠的。
Part.2
实验组和对照组
如下表,对照组1可以更好的体现出实验组是否互作。对照组2可以避免诱饵序列突变(或无诱饵)的情况下,猎物直接激活报告基因而造成的假阳性,这种假阳性并不多见,可以省略。
总结
通用对照只是证明酵母杂交体系是正常的,并不是必须的。通过比较实验组和对照组,能得出pBait和Prey互作即可。
本方案中对照组Y1HGold[pBait-AbAi + AD- Empty]既可以作为自激活组,也可以作为对照组,可以很好的比较出实验组是否互作。
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