生化分析仪项目为什么要按照这个顺序?

文摘   2024-11-07 07:03   重庆  



01 试剂交叉污染了,怎么办?


在使用全自动生化分析仪的过程中,常常出现一种情况:单独进行某个项目检测时,结果正常无误,但当该项目与某些项目组合在一起检测时,结果却出现异常。究其原因,主要是随着全自动生化分析仪使用时间的不断增加,其清洗系统的清洗效果逐渐减弱,从而导致试剂交叉污染的程度不断加大。由于全自动生化分析仪各试剂间的相互干扰,对检验结果的准确性和可靠性产生了极大影响,会给检验结果带来较大偏差。在某些情况下,甚至可能误导临床医生,进而延误患者的病情。

所以,在日常生化检验工作中,避免试剂间的干扰显得极为重要且迫切。


02 试剂间相互干扰的类型


试剂中如果存在下一个检测所需测定的底物,或者所含的某种试剂成分与下一个反应的底物有相互作用,那么就会直接干扰下一个反应的测定结果。

还有一种情况是,该试剂所引发的反应会对下一个项目的反应进程产生间接干扰。在存在试剂污染的状况下,下一个测试所测定的其实是前后两个项目反应的综合作用结果。


03 部分已知的常用试剂间可能产生的相互干扰


1.pH 值改变对检测结果的影响及原理


在生化检测过程中,仪器携带污染致使试剂中反应缓冲液的变化,从而引起 pH 值改变,这会对下一反应产生显著影响,使反应无法达到最佳状态。

以双缩脲法测定血清总蛋白为例,在其他条件恒定的情况下,仅当反应处于碱性环境(pH 值 8 - 9)时,蛋白肽键(—CONH)方可与碱性铜溶液发生作用,呈现紫色反应,进而准确测定血清蛋白总量。若 pH<8,总蛋白测定结果会偏低,这种偏差将直接累及球蛋白、白蛋白 / 球蛋白比值的结果准确性。

对于酶活力测定而言,在最适 pH 值条件下,反应速度最快且灵敏度最高。然而,由于缓冲体系的缓冲能力有限,仪器携带污染引发的 pH 值变化可能导致酶促反应出现无效值。多数酶反应的适宜 pH 值范围在 6.0 - 7.5 之间,值得注意的是,碱性磷酸酶(ALP)、γ - 谷氨酰转肽酶(γ - GT)、乳酸脱氢酶(LDH)等酶的反应则需在碱性条件下才能达到最佳状态。

2.特定试剂成分对相关检测项目的干扰


  1. 胆酸盐的干扰
    甘油三酯(TG)、总胆固醇(T - CH)、尿酸(UA)、镁离子(MG)试剂中含有的胆酸盐,会对循环酶法测定胆汁酸造成严重干扰,影响胆汁酸测定结果的准确性。

  2. LD 成分相关干扰
    丙氨酸氨基转移酶(ALT)(IFCC 法)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)(IFCC 法)试剂中含有高活力乳酸脱氢酶(LD)成分,这极有可能对 LD 的测定产生干扰,破坏 LD 测定结果的可靠性。

  3. Glu 成分相关干扰
    肌酸激酶(CK)(NAC - activated)、肌酸激酶同工酶(CK - MB)(NAC - activated)试剂中含有葡萄糖(Glu)成分,鉴于其分析方法原理涵盖 Glu 的己糖激酶(HK)反应过程,因此可能对 Glu 测定带来干扰,尤其在采用 HK 法测定 Glu 时,这种干扰可能更为严重。
  4. 镁盐相关干扰
    葡萄糖(Glu)(HK 法)、肌酸激酶(CK)(NAC - activated)、肌酸激酶同工酶(CK - MB)(NAC - activated)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL - C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL - C)(直接法)等试剂中使用了镁盐,这种情况可能对后续 Mg²⁺测定产生干扰。同时,总蛋白(TP)试剂中高浓度的 Cu²⁺也会对 Mg²⁺测定造成影响。

  5. 钾离子相关干扰
    丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK - MB)、尿酸(UA)、γ - 谷氨酰转肽酶(r - GT)、总蛋白(TP)、乳酸脱氢酶(LDH)等试剂中含有钾离子(K⁺),由于其与 K⁺的酶法测定存在相同或相反的进程,因此会对 K⁺的酶法测定产生干扰,影响 K⁺测定结果的准确性。

  6. 磷酸缓冲液相关干扰
    胆碱酯酶(ChE)(Butyrylthiocholine)、总胆固醇(TC)(ChOD - PAP)、葡萄糖(Glu)(GOD - PAP)、尿酸(UA)(Uricase)、α - 羟丁酸脱氢酶(α - HBDH)(DGKC)等试剂使用磷酸缓冲液,这可能会对无机磷的测定产生干扰,干扰无机磷测定结果的精准度。

  7. EDTA 成分相关干扰
    镁离子(Mg²⁺)试剂(Calmagite)中含有 EDTA 成分,EDTA 是钙离子(Ca²⁺)络合剂,这种成分可能会对 Ca²⁺的测定带来干扰,从而影响 Ca²⁺测定结果的正确性。

  8. CK 检测顺序相关干扰
    肌酸激酶(CK)检测不应安排在碱性磷酸酶(ALP)、钙离子(Ca)检测之前。因为 CK 反应液中加入了 EDTA - Na,这种物质会抑制 ALP 活性,并与 Ca 结合,进而导致 ALP 和 Ca 的检测结果偏低。
  9. BUN 酶法测定相关干扰
    尿素氮(BUN)酶法测定过程中,由于谷氨酸脱氢酶(GLDH)会消耗烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH),所以该检测不能安排在底物为 NADH 的项目(如丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST))之前进行,否则会影响后续检测结果的准确性。


04 干扰的排查和发现


在实际情况中,各厂家所提供的产品说明书通常无法全面呈现试剂组成状况,与此同时,生化反应受到的影响因素异常复杂。鉴于此,通过实验途径来探究试剂交叉污染可能引发的干扰问题就凸显出至关重要的意义。


具体而言,可借助以下几种试验方法来排查和发掘试剂间可能存在的干扰情形:


  1. 1.选取某一试剂作为样本,对全套项目展开测定,并深入考察测定结果。以此为依据,确定在试剂交叉污染发生时,会产生直接干扰的项目。对于双试剂而言,R1 和 R2 均需进行上述测定操作,如此一来,在处理干扰问题时能够更具针对性,从而提高解决问题的效率和准确性。


  2. 2.取一份样本,将其平均分为两份。其中一份加入生理盐水或者其他适宜的稀释液,另一份则加入等量的试剂。随后,同时对这两份样本进行测定,并仔细考察测定结果的变化情况。通过这种方式,可以确定在可能发生试剂交叉污染时,对哪些项目造成干扰,为后续的分析和应对提供有力的数据支持。


  3. 3.当怀疑 A 项试剂对 B 项目存在干扰时,可以先使用样本单独进行 B 项目的测定,重复若干次。之后,先执行 A 项目的测定,紧接着再进行 B 项目的测定,同样重复若干次。最后,运用统计学分析方法对这些数据进行处理,从而准确知晓 A 试剂通过试剂针对于 B 项目的干扰程度,为评估和控制这种干扰对检测结果的影响提供量化依据。



05 干扰的消除


生化分析中,通过剖析试剂干扰原因和排查试验,可针对性地消除试剂间干扰,常用方法如下:


一、仪器保养降低干扰


定期保养仪器可减少试剂间相互干扰。需定期更换管道,用去污剂、酸性洗液清洗比色杯,用去污剂擦拭试剂针,用苯甲醇擦洗搅拌棒,以此维持仪器良好状态,避免试剂污染。


二、合理安排检测顺序


  1. 基本原则:安排检测项目顺序时,两个项目间宜至少有一个非干扰项目,最好将被干扰项目置于干扰项目之前,以消除干扰。

  2. 人员要求:检验人员要熟知仪器状态,选择样本项目时考虑试剂交叉污染可能,合理安排顺序,保证结果准确。

  3. 推荐顺序:常见生化项目推荐检测顺序为 P、Alb、DBIL、TBIL、K、Ca、CK、TBA、TG、AFU、ALT、CK - MB、APOA1、T - CH、APOB、Cl、HDL - C、LP(a)、AST、GPDA、AMY、LDL - C、BUN、UA、CHE、ADA、r - GT、Mg、Na、ALP、LDH、GPDA、TP、Cr。


三、利用仪器冲洗功能


部分生化分析仪有额外冲洗功能。在被干扰项目检测前,用酸性洗液、碱性洗液对试剂针、比色杯多次冲洗,可减少交叉污染。


四、利用不同通道检测


一些全自动化分析仪有不同通道,可将有干扰项目置于不同通道检测,利用物理隔离避免试剂交叉污染。


五、选用抗交叉污染试剂盒


优先选有抗交叉污染特性的试剂盒,如游离胆固醇试剂中添加胆固醇酯抑制剂,可减少对游离胆固醇测定的污染。


综合运用上述方法可解决大部分试剂交叉污染问题。但全自动生化分析仪连续多项目测定时,反应过程复杂难测,所以实际工作中要熟悉分析仪原理、方法、流程、状态和试剂组成、反应原理,理论结合实际,摸索出适合本单位的方法,保障检测结果准确可靠。



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