昨天“NGS自动建库仪交流基地”有个伙伴请教一个问题，大佬们的回复又特别精彩，再写篇文章记录：
问题：有个全血提取的DNA样本（冻存），qubit定量结果:123ng/ul，nanodrop定量没有吸光度，像这种是什么原因，是什么物质影响的。NanoDrop One 分光光度计在检测时如果显示不成液柱，电泳条带挺好，另外这个样本洗脱之后，相对其它样本有些发黄。
大佬1回答：
1.如果你用的常规的Qubit试剂，这个结果可能超出你试剂的标曲范围了，建议稀释后重测；
2.测Nanodrop时，从侧面看一下液柱是否正常，点样的时候注意溶液是否容易粘吸头，液体表面张力是否正常；
3.对照电泳结果，通常带电泳有条带，那在260nm就一定是有吸光度的。
个别有问题的样本可以用柱法重提一下，这个通常会比磁珠法的纯度好一些，这样可以解决样本后续应用的问题。如果你还想确认为什么出现这种情况，还需要这个血样，再做一遍磁珠法。
提问老师：从原理上看，没有吸光度还是表面张力的原因，估计还是有试剂残留。赞同重新提取试下。
大佬1继续回答：
测OD时用TE做空白，不管是溶解了DNA、RNA、蛋白，在检测时都会引起吸光度的增加，（本身OD检测也是用的这个原理），但是，偶发情况是试剂残留可能引起某些波长区间的吸光度变弱（光透过增强了），这种情况也就是在230nm区间遇到过。要是“试剂残留”引起260nm区间的透光性增强，这个确实没有遇到过，还是考虑检测时液柱的问题。磁珠纯化后再做一次OD检测，看看是否有改善，期待您的结果。
残留的不一定是试剂，也可能是未消化完的蛋白，糖分子也可能，如果采样前吃过肥肉，血脂也会比较高，也可能残留脂肪，这些都是造成血液细微差异的变动因素。
大佬2回答：没有形成液柱，就是光直接从空气透过去了，所以没有吸光度，甚至是负值。至于为什么没有形成液柱，那就是个物理问题了，可能情况包括乙醇残留，因为乙醇挥发性强，导致表面张力下降，另外有可能是样本的多糖或者脂肪残留。结合说的样本发黄，那要不就是三高要不就是溶血。
