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母血污染的实验原理是基于染色体上的短串联重复序列(shorttandemrepeat,STR)，采用荧光引物进行PCR扩增和毛细管电泳的一种片段分析的技术。
01
什么是短串联重复序列
02
遗传标记STR的特点
实验的原理
采用多对不同颜色的荧光引物，对基因组上的STR位点进行扩增，最后生成许多片段大小不同的各色荧光标记的DNA片段。
接着，将扩增产物与分子量标准品进行混合。
分子量标准品是使用与待检产物不同的荧光染料标记的已知大小的DNA片段混合物。
1、荧光标记的DNA在电场中由负极向正极移动,依次通过激光检测区,小片段在前,大片段在后。
2、激光束在检测窗口同时激发16/4根毛细管,荧光分子被激发,产生荧光信号。
3、发射的荧光信号被CCD相机收集。
4、软件将光学信号转化为电信号。
实验的流程
样本收集
样本收集主要包括绒毛、羊水、脐血、外周血、流产组织、精液、颊粘膜。
核酸提取
红细胞的裂解→蛋白酶K+GBbuffer→56度孵育10分钟→转移到离心柱中离心→GDbuffer洗涤（去除蛋白）→PWbuffer洗涤（去除盐离子）→TB溶解（50-200微升）→DNA定量
标本扩增
AB3500毛细管电泳
结果分析
羊膜腔穿刺术和绒毛穿刺取样术是目前产前诊断中获取胎儿组织标本的主要方式。这些有创性取样技术，存在母体细胞污染（MCC），研究发现，单胎妊娠MCC的发生率主要取决于取样方案、术者技术水平等，一般认为，绒毛穿刺取样术的MCC发生风险大于羊膜腔穿刺羊水取样术。
STR与母源污染-污染（胎儿+母血）
通过对比胎儿样本和母亲样本STR图谱位点峰的来源，便可以判断是遗传自父母还是取样时母血污染导致的，继而判断样本是否存在母血污染。
01
母源污染判断
1、污染的胎儿样本图谱位点中能找到所有母亲位点分型峰。
2、当母亲某STR位点为杂合子时，胎儿样本该位点出现非遗传的位点峰时，提示可能存在污染，这时需要对比胎儿该位点遗传自父亲的位点峰和母亲非遗传峰的比值，若比值大于10%，判断为污染有效位点。
母源污染STR位点图
非母亲DNA造成的羊水污染STR位点图
3、在满足1的情况下，有效位点数大于3个的胎儿样本判断为母血污染样本。（注意：二倍母源性和单倍父源性的三倍体不属于母血污染。）
02
母源污染鉴定的
其他提示作用
1、可提示早期流产组织多倍体情况；
2、可提示部分性染色体异常：47-XXY,47-XYY；
3、可提示部分21-三体，18-三体，13-三体等；
4、其他个体识别。
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