布氏杆菌病是一种由布鲁氏菌引起的人兽共患动物源性细菌性传染病,除了通过血培养、脓汁培养查菌,也可以通过采集血液来进行检测。现阶段布病的检测方法较多:如虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。
由于布氏杆菌生长缓慢,一般生长时间>3天,所以想要快速筛查一下是否得布病,虎红凝集试验是一个非常好的选择,既方便又快速。
所需设备和试剂:虎红试剂,患者血清,一小块纸板或者玻璃板都行(我们医院使用的是免疫做TRUST的类似纸板)
试剂:抗原是酸性(PH3.6-3.7)带色的抗原(可以理解为灭活的布鲁菌菌体),该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的lgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是lgG类,因此提高了反应的特异性。
操作方法
1、实验前,应将试剂在室温放置30min。
2、将各方格标记被检血清号,然后加相应被检血清30μL(0.03mL)。
3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原30μL(0.03mL)。试剂在使用前必须摇匀。想像一下,里面都是灭活的布鲁菌菌体,如果不摇一下,肯定都沉在下面了。
4、直接用枪头搅动血清和抗原,使之充分混合,在4分钟内观察结果。
5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对照。
结果判读
1、在阴、阳性血清对照成立的条件下,方可对被检血清进行判定。
2、受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+),无凝集现象,呈均匀粉红色者判为阴性(-)。一定注意超过4min没有判定意义。
3、在观察时可将凝集板进行摇动使混合液流动,更利于结果的观察。
这五个样本中,12,19号对应的为阳性,其余3个为阴性。
注意事项(个人感悟)
1、这个试验本质上还是抗原抗体反应,所以脂血等是否有影响,我觉得会有,但是影响多大,目前我还没有查到相关资料,我觉得可以参考TRUST试验。我们做过一个黄疸的血,加完试剂后,就由这个玫粉色变成了橘红色。
2、本试验温度在室温22±4℃进行结果更加准确。
3、凡是试验中凝集颗粒不规则,大小不匀,片状或絮状,凝集不清澈者,一般为假阳性,反之凝集颗粒规则大小均匀,凝集清澈者为阳性。【我们医院这个试验也是刚开,假阳性目前还没有遇到过,有相关图片的同学,可以给我们提供,让更多的同行看到。另外我们目前还没有在显微镜下看过,对于假阳性是否在显微镜下观察能更好一些,我们也没有相关经验,如果有同行有这方面的经验,希望能给大家一起分享】
4、抗原的质量是影响布病血清学试验结果准确性的关键性因素之一,一定要采购正规厂家、产品稳定、经国家认可的产品。运输过程中要2-8℃冷链运输,以确保产品质量。
以上也是我们个人的一些看法,如果有什么错误的地方,请大家批评指正。
关于血培养中查布氏杆菌,以前陈东科老师推荐的柯氏染色法,效果真的很好,不需要特殊的一起,可以推广。后期陈老师又给我们指导过一次,可以第一液可以滴完后,再在火焰上直接加热一分钟。