今天给大家分享一篇文献《Development of an infectious clone and replicon system of norovirus GII.4》
人类诺如病毒 （Human norovirus，HuNoV）感染是全球急性胃肠炎的主要原因之一，至少占所有病例的20%。HuNoV的感染性克隆将是阐明病毒感染过程和复制机制的有用工具。
该研究将 HuNoV GII.4 Sydney 亚型的完整基因组克隆到先前修饰的基于 pcDNA3.1 的质粒载体中，置于CMV启动子下游。并且在NTPase和p22基因之间插入绿色荧光蛋白（GFP）的报告基因来监测体外病毒感染。另外，该研究也构建了HuNoV-GFP复制子。
首先，作者将HuNoV GII.4 Sydney subtype (2012)株全基因组插入修饰的pcDNA3.1载体，置于CMV启动子和BGH PolyA信号之间，并且在pHuNoV的polyA后引入HDV核酶。
pHuNoV感染性克隆构建示意图（L M Oliveira et al. 2018. J Virol Methods）
将pHuNoV感染性克隆质粒转染caco2细胞，用抗NoV GII.4株VLP的抗血清通过免疫荧光可以检测到人诺如病毒主要衣壳蛋白VP1和次要衣壳蛋白VP2的表达。
anti-VLPs抗体验证pHuNoV感染性克隆VP1/VP2表达（L M Oliveira et al. 2018. J Virol Methods）
为了构建pHuNoV-GFP，作者将GFP基因插入NTPase和p22之间，然后在GFP的两端插入YELQ/ GPED序列，通过病毒蛋白酶的作用切割GFP。
pHuNoV-GFP构建示意图（L M Oliveira et al. 2018. J Virol Methods）
将构建的pHuNoV-GFP转染caco2细胞，48小时后通过免疫荧光可以检测到VP1和VP2的表达。
anti-VLPs抗体验证pHuNoV-GFP 复制子VP1/VP2表达（L M Oliveira et al. 2018. J Virol Methods）
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