跑WB,一样的上样量但个别泳道的条带被挤了,重复了3次都这样,怎么办?

学术   2024-04-02 13:41   安徽  
如下图所示,我们可以看到图中每个泳道都有多个非特异性的条带,并且用红色标记出来的2个泳道与其他周围泳道相比条带明显更窄,有被挤压的现象,且目标蛋白条带有拖尾。
那么,问题来了……
为什么会出现这种情况呢?

(shark供图)

首先,要解决一个问题,我们需要先知道导致问题的可能原因,再去逐个排查。而个别泳道被挤压的可能原因包括:
1. 电场力的问题

电场不均匀,导致某些泳道受到更强的电场影响。

电泳条件设置不当,如电流过大或电压过高,会加剧样品在凝胶中的移动速度,增加挤压可能。

2. 凝胶的问题
凝胶浓度过高或分子量范围选择不当,样品无法很好地分离,容易叠加在一起挤压。
凝胶制备时,样槽填充不均匀。
3. 样品的问题
装载样品时未均匀分布在各个泳道中。
②不同泳道间品浓度差异过大,浓样可能会挤压稀样(上图极有可能是这个原因)。
品加载量过多,导致样品在凝胶中过于稠密,易相互挤压。
参考解决办法:
1. 检查电场均匀性,确保内槽中的电泳液均是新配制的,调整电场强度,不要过高,确保各个泳道受到相同的电场影响。
2.根据目的蛋白分子量大小选择合适浓度的凝胶,配制凝胶时一定要充分混匀,确保均匀,不要使用不合格的凝胶。
3. 调整泳道之间的距离,确保足够的空间让样品在运行过程中不会相互干扰,如果15孔跑出来效果不好,可以换10孔的跑。
4. 在装载样品时,充分混匀样品,必要时离心取上清上样,以确保样品均匀分布在各个泳道中,避免出现样品堆积的情况。
5. 确保泳道宽度一致,避免出现某些泳道受到挤压的情况。如果有必要,可以重新制作泳道板或者调整泳道宽度。

由于shark在提问时并没有具体描述细节比如在3次重复的过程中样品有没有换过,是技术学重复还是生物学重复如果是技术学重复,天内重复还是天间重复所以在此只能粗略作答,希望能对有类似问题的你有所启发;也希望大家在问问题的时候尽量描述详细一些,这样得到的答案也会更加具体。

今天的分享就到这啦! 欢迎大家留言区交流,发表你不同的见解

小伙伴们,我们下期见

See you.

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智者不学生物
中科院博士,讲解-生物学、生命科学-基础理论和实验方法,文章套路解读,分享protocol、软件、电子书和实用网站
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