如下图所示,我们可以看到图中每个泳道都有多个非特异性的条带,并且用红色标记出来的2个泳道与其他周围泳道相比条带明显更窄,有被挤压的现象,且目标蛋白条带有拖尾。
(shark供图)
首先,要解决一个问题,我们需要先知道导致问题的可能原因,再去逐个排查。而个别泳道被挤压的可能原因包括:①电场不均匀,导致某些泳道受到更强的电场影响。
②电泳条件设置不当,如电流过大或电压过高,会加剧样品在凝胶中的移动速度,增加挤压可能。
①凝胶浓度过高或分子量范围选择不当,样品无法很好地分离,容易叠加在一起挤压。②不同泳道间样品浓度差异过大,浓样可能会挤压稀样(上图极有可能是这个原因)。③样品加载量过多,导致样品在凝胶中过于稠密,易相互挤压。1. 检查电场均匀性,确保内槽中的电泳液均是新配制的,调整电场强度,不要过高,确保各个泳道受到相同的电场影响。2.根据目的蛋白分子量大小选择合适浓度的凝胶,配制凝胶时一定要充分混匀,确保均匀,不要使用不合格的凝胶。
3. 调整泳道之间的距离,确保足够的空间让样品在运行过程中不会相互干扰,如果15孔跑出来效果不好,可以换10孔的跑。4. 在装载样品时,充分混匀样品,必要时离心取上清上样,以确保样品均匀分布在各个泳道中,避免出现样品堆积的情况。5. 确保泳道宽度一致,避免出现某些泳道受到挤压的情况。如果有必要,可以重新制作泳道板或者调整泳道宽度。由于shark在提问时并没有具体描述细节:比如在3次重复的过程中样品有没有换过,是技术学重复还是生物学重复?如果是技术学重复,是天内重复还是天间重复呢?所以在此只能粗略作答,希望能对有类似问题的你有所启发;也希望大家在问问题的时候尽量描述详细一些,这样得到的答案也会更加具体。
今天的分享就到这啦! 欢迎大家留言区交流,发表你不同的见解。
小伙伴们,我们下期见
See you.
看完点关注,科研不迷糊
如果你觉得有用的话,就帮忙点个「赞」和「再看」吧。