今天给大家分享一篇文献《Construction and characterization of an infectious cDNA clone of Echovirus 25》
埃可病毒25型 （Echovirus 25，E-25） 是肠道病毒家族的成员，是一种常见的病原体，可诱发手足口病 （hand, foot, and mouth disease，HFMD）、脑膜炎、皮疹和呼吸道疾病。在这项研究中，作者构建了并表征了源自 E-25 -XM0297 毒株的全长cDNA感染性克隆，该克隆是在中国厦门分离出的第一个亚基因型D6毒株。
该E-25（XM0297）毒株的5'非翻译区（5-UTR）、P3（3A-3B、3D）和P3（3C）区分别与EV-B77、E-16和E-13高度相似。该研究数据表明，拯救的 E-25 病毒表现出与亲本毒株XM0297相似的生长动力学。
该研究也使用透射电子显微镜（TEM）观察了拯救的病毒颗粒，发现它们具有二十面体结构，直径约为30纳米。
交叉中和试验表明，E-25（XM0297）毒株免疫血清不能中和EV-A71、CV-A16或CV-B3。同样的，EV-A71 和 CV-A16 的免疫血清不能中和E-25（XM0297）毒株。这种感染性克隆将大大加强未来的病毒学研究和可能的针对E-25的疫苗开发。
首先，作者将埃可病毒25型XM0297毒株全基因组全长插入pSVA载体，5'端含有T7启动子，3'端含有polyA，得到pSVA-E25 XM0297感染性克隆质粒。
E25毒株全长感染性克隆构建示意图（Wangheng Hou et al. 2015. Virus Res）
然后作者将pSVA-E25 XM0297感染性克隆质粒和pAR3126质粒（表达T7 RNBA聚合酶的质粒）共转293T细胞72h得到拯救的病毒。将拯救的E25病毒感染RD细胞12小时即可观察到60%的CPE。
用抗E-25血清作IFA可以检测到病毒E-25感染的阳性细胞。
一步生长曲线结果表明，在不同moi感染时，拯救的pSVA-XM0297病毒和野生型XM0297病毒具有相同的生长特性。
RD细胞感染后的表型特征（Wangheng Hou et al. 2015. Virus Res）
最后，作者测试了E-25免疫血清和CV-A16、EV-A71和CV-B3之间的交叉中和活性，发现E-25免疫血清不能交叉中和CV-A16、EV-A71和CV-B3。同样，EV-A71和CV-A16的免疫血清也不能交叉中和E-25。
免疫血清交叉中和测试（Wangheng Hou et al. 2015. Virus Res）
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