配方一(需要50℃水浴,适用于NC和PVDF膜):
β-mercaptoethanol 342 μl
20% SDS 5 ml
1M Tris-Cl pH 6.7 3.125 ml
加ddH2O至50 ml
使用方法:将用过的膜浸入stripping buffer中,置50℃水浴箱中30min,间歇性震荡。然后用TBS洗5min/次,直到没有beta-mercaptoethanol的味道就行。然后就可以重新孵一抗了。
配方二(常温,适用于PVDF膜):
50mM Glycine-NaOH(pH10.8)
7M Guanidine hydrochloride
100mM KCl
0.2mM EDTA
22.5uL beta-mercaptoethanol
总体积为10mL
使用方法:将用过的膜先用TBST或PBST洗10min。加入stripping buffer常温洗10min。用TBST或PBST洗3次,每次10min。重新封闭后孵一抗。
配方三(常温,温和型,适用于NC和PVDF膜):
15g glycine
1g SDS
10mL Tween20
调节pH至 2.2
加ddH2O定容至1L
使用方法:加入stripping buffer常温洗10min。弃去加入stripping buffer,加入新的stripping buffer常温洗10min。PBS洗2次,每次10min。再用TBST或PBST洗2次,每次10min。重新封闭后孵一抗。
配方四(常温,适用于NC和PVDF膜):
100 mM glycine
200 mM NaCl
0.1% Tween 20
0.1% β-mercaptoethanol
调节pH至 2.5
使用方法:加入stripping buffer常温洗45min。PBS洗2次,每次10min。再用TBST或PBST洗2次,每次10min。重新封闭后孵一抗。
作者本人使用的是配方三,优点是常温,适用于NC和PVDF膜。根据作者经验,配方三比较温和,一张膜可以反复剥离和敷抗体三次没问题。剥离效果非常干净,实际上配方三的这个stripping buffer可以重复使用3次以上都没问题。