常用试剂配方-WB膜再生液-stripping buffer

学术   科学   2024-05-26 17:41   安徽  

配方一(需要50℃水浴,适用于NC和PVDF膜):
β-mercaptoethanol 342 μl

20% SDS 5 ml

1M Tris-Cl pH 6.7 3.125 ml

加ddH2O至50 ml

使用方法:将用过的膜浸入stripping buffer中,置50℃水浴箱中30min,间歇性震荡。然后用TBS洗5min/次,直到没有beta-mercaptoethanol的味道就行。然后就可以重新孵一抗了。

配方二(常温,适用于PVDF膜):

50mM Glycine-NaOH(pH10.8)

7M Guanidine hydrochloride

100mM KCl

0.2mM EDTA

22.5uL beta-mercaptoethanol

总体积为10mL

使用方法:将用过的膜先用TBST或PBST洗10min。加入stripping buffer常温洗10min。用TBST或PBST洗3次,每次10min。重新封闭后孵一抗。

配方三(常温,温和型,适用于NC和PVDF膜):

15g glycine

1g SDS

10mL Tween20

调节pH至 2.2

加ddH2O定容至1L

使用方法:加入stripping buffer常温洗10min。弃去加入stripping buffer,加入新的stripping buffer常温洗10min。PBS洗2次,每次10min。再用TBST或PBST洗2次,每次10min。重新封闭后孵一抗。

配方四(常温,适用于NC和PVDF膜):

100 mM glycine

200 mM NaCl

0.1% Tween 20

0.1% β-mercaptoethanol

调节pH至 2.5

使用方法:加入stripping buffer常温洗45min。PBS洗2次,每次10min。再用TBST或PBST洗2次,每次10min。重新封闭后孵一抗。


作者本人使用的是配方三,优点是常温,适用于NC和PVDF膜。根据作者经验,配方三比较温和,一张膜可以反复剥离和敷抗体三次没问题。剥离效果非常干净,实际上配方三的这个stripping buffer可以重复使用3次以上都没问题。





智者不学生物
中科院博士,讲解-生物学、生命科学-基础理论和实验方法,文章套路解读,分享protocol、软件、电子书和实用网站
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