今天给大家分享一篇2002年发表在Science期刊上的文章“Chemical synthesis of poliovirus cDNA: generation of infectious virus in the absence of natural template”。
感染性克隆构建思路：
作者将脊髓灰质炎病毒1型（Mahoney）的全基因组分成三段（F1、F2和F3）进行化学合成。将F1（含T7启动子）插入pUC18载体中，将F2插入pGEM-T easy载体中，将F3插入pUC18载体中。
分别用SnaBⅠ和EcoRⅠ酶切F1-pUC18和F2-pGEM-T easy，从而将F1和F2片段连接，插入pUC18载体中得到F1-2-pUC18。
接着用SalⅠ和EcoRⅠ酶切pBR322载体和F1-2-pUC18，从而将F1-2片段插入pBR322载体中，得到F1-2-pBR322
最后，分别用MluⅠ和EcoRⅠ分别酶切F1-2-pBR322和F3-pUC18，从而将F1-2-3插入pBR322载体中得到脊髓灰质炎病毒全基因组感染性克隆。
脊髓灰质炎病毒1型（Mahoney）基因组结构及其全长cDNA的合成策略（Jeronimo Cello et al. 2002. Science）
通过T7 RNA聚合酶体外转录得到脊髓灰质炎病毒1型（Mahoney）（PV1(M））的基因组RNA，转染HeLa细胞能够拯救出病毒。
HeLa细胞中脊髓灰质炎病毒空斑（Jeronimo Cello et al. 2002. Science）
最后作者比较了通过化学合成法构建的sPV1(M）感染性克隆拯救的病毒和野生型脊髓灰质炎病毒wt PV1(M）的生物学特征。
发现受体特异性单抗Mab D171和1型脊髓灰质炎病毒特异性兔超免血清anti-PV1(M)能够完全中和sPV1(M）和wt PV1(M）的感染。而2型脊髓灰质炎病毒特异性超免血清(Lansing) [PV2(L)]不能中和sPV1(M）和wt PV1(M）的感染。
通过测定PLD50（50% 的接种小鼠中导致瘫痪或死亡的病毒量）发现，sPV1(M)的PLD50要高于wt PV1(M)，说明sPV1(M)的毒力弱于wt PV1(M)。
作者认为是其在PV1(M)基因组的5'NCR区域和2B上引入XmaⅠ和StuⅠ酶切位点导致的突变，从而通过一种未知的机制引起sPV1(M)的毒力降低。
sPV1(M)的生物学特征（Jeronimo Cello et al. 2002. Science）
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