在抗体药物与诊断原料研发前期，高通量抗体效价测定对于高效的细胞系开发 (CLD) 过程非常重要。对于工作流程早期的效价筛选，单个细胞株样品量少，表达丰度低，尤其是双特异性抗体（Bispecific Antibody，bsAb，后简称为双抗）其研发过程会存在大量由于错误组装产生的产品相关杂质。
在筛选的时候，不仅需要筛选出能高效表达大量双抗的细胞株，还要找到那些产生正确组装双抗的细胞株。因此，此类抗体的细胞株开发较为复杂。筛选出稳定高产的细胞株可以降低开发成本、提升生产效率与产品质量。
Biacore提供了一种低样本消耗、高灵敏度、高效及无人值守的解决方案，能够在短时间内（8至10小时）评估多个96孔板的抗体效价，而且检测动态范围广。在双抗细胞株开发中，利用Protein A芯片进行滴度测定+三明治法，可以同时评估双抗的克隆表达水平及纯度。
接下来，我们将一起探讨，Biacore 8K+是如何筛选出高性能的CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）。
一
材料与方法
材料：CHO-K1细胞系，培养阶段：静态板阶段及摇动深孔板阶段。
表1：产品信息
方法：
抗体效价测定：在静态板培养阶段，通过Protein A结合法直接测量抗体效价，筛选出表达良好的细胞株，实验方案如下图1a所示。
图1a
正确配对的双抗测定：在振荡深孔板阶段，除了Protein A结合法外，进一步使用包含CD3和一种类蛋白L肽结合的夹心测定法来检测双抗是否正确组装，实验方案如下图1b所示。
图1b
IgG测量：使用Cedex-Bio分析仪测量IgG以确认总抗体效价。
LC-MS验证：使用LC-MS以确认bsAb配对。
HPLC验证：通过MabSelect VL补料分批培养物进行纯化，并使用HPLC验证bsAb的组成。
二
结果
在细胞株开发 (CLD) 的不同过程中，研究人员成功地使用了Biacore 8K+系统的Protein A测定法（图2–4）和夹心测定法（图3–4），进行抗体效价筛选，以挑选出具有正确组成的双抗及高表达双抗的细胞株。在分析时，以正确形式双抗/总抗体表达量的比例做为选择依据。
图2：从20个静态培养阶段96孔板中进行首次筛选出的总抗体效价
图3：振荡深孔板培养阶段的96深孔板中筛选的总抗体效价和正确组装的双抗
图4：筛选出7个克隆进行滴度筛选，在摇瓶中进一步培养。使用Biacore进行蛋白总Ab滴度和正确bsAb组装分析。总Ab滴度使用Cedex-Bio IgG测定法测量
图5：用PreDictor MabSelect PrismA板纯化这七个克隆，通过LC-MS确认正确配对和错误配对的bsAb的数量
图6：通过HPLC分析验证MabSelect VL纯化后的7个克隆的双抗组成
小 结
Biacore SPR系统所得数据与LC-MS数据及纯化数据的高度一致性，印证了该系统的可靠性与准确性。Biacore 8K+ SPR系统在细胞株开发过程中扮演着至关重要的角色，特别是在双特异性抗体（双抗）生产细胞株的早期表征与筛选阶段，它提供了一种新颖的、快速的检测方法。Biacore SPR系统能够高效地识别并筛选出高产且组成正确的双抗克隆，从而极大地促进了研发进程。
Biacore以其低样品消耗和高检测灵敏度等特性，在早期细胞株的正确鉴定中展现出显著的优势。
Biacore具有出色的样品兼容性，能够从容应对粗样品的检测挑战。
Biacore系统内置了浓度定量和分析模块，能够提供稳定且高度重复的检测结果。
Biacore的芯片允许多次再生使用，极大降低了每个样品的检测成本，使其低于1元。
这些特点使得Biacore成为生物分析领域中不可或缺的工具，其应用伴随着生物技术的发展也在不断扩展。为科研和药物开发提供了强有力的支持。
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Biacore 8K plus cell line development
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