抗体纯化的老师一定对于Protein G不陌生，抗体亲和填料常用的配基包括Protein A、Protein L和Protein G，不同的配基能够结合抗体结构上不同的结合位点，因此能够用于不同种类抗体的纯化，不同配基结合抗体的结构如下图所示：
图1：不同配基的抗体结合位点示意图
在同样能够结合Fc段的前提下，Protein G相比于Protein A，能够结合真核来源的抗体种属和种类更加广泛，因此被应用于各种不同的抗体纯化场景，如在从血清、腹水和组织培养基中分离和纯化IgG，单克隆抗体纯化以及抗体-配基免疫复合物的分离。说到Protein G配基的层析柱，让我们请出今天的主角产品:HiTrap Protein G HP (29048581) 。
表1：HiTrap Protein G HP的产品参数
柱体积 | 1 mL |
柱床尺寸 | 7×25 mm |
柱床高度 | 25 mm |
结合载量/层析柱 | 25 mg人IgG/层析柱 |
流速 | < 4 ml/min |
压力最大值 （操作时柱床压力） | 3bar [0.3 MPa] 43.5 psi |
应用场景 | 设计用于与注射器、蠕动泵或层析系统配合使用 |
储存 | 2至8°C，20%乙醇 |
HiTrap Protein G HP层析柱预填充有Protein G Sepharose High Performance填料。该款Protein G亲和填料相较于Protein A填料可结合真核来源的多种IgG和更多IgG亚类，是实验室规模下通用型抗体捕获的首选方案。使用此款层析柱可从牛、绵羊、马、大鼠、小鼠和人源（包括腹水、血清和细胞培养上清液）中纯化IgG。不仅在纯化方向，在分析检测方向，这款层析柱也有不俗表现，让我们一起来看看吧！
在保健食品行业，将IgG添加到婴幼儿配方奶粉、保健食品中，可以增强免疫力，调节某些机体特定的生理功能和物质代谢，对于改善婴幼儿、中老年人及免疫力低下的人群的健康有重要意义。但是作为一种食品添加剂，检测相应的IgG含量，就成为这类保健食品质量控制中关键的一项。目前，对于免疫球蛋白G (IgG) 的定量检测，国内外主要方法有：酶联免疫法 (ELISA) 、琼脂双向或单向免疫扩散法 (RID) 、免疫电泳法、高压液相色谱法 (HPLC) 等等。
在2003年颁布的国标《保健食品中免疫球蛋白IgG的测定》 (GB5009.194—2003) 中，就规定了使用HiTrap Protein G HP (29048581) 对保健食品中IgG进行含量检测的方法。这一方法可用于片剂、粉剂及胶囊剂型保健食品中IgG的检测，操作简单。
图2：《保健食品中免疫球蛋白IgG的测定》及其检测条件
使用HiTrap Protein G进行IgG含量检测可不止局限于保健食品，在动物饲料中检测IgG含量也使用的是基于Protein G配基亲和层析的方法。之所以需要在动物饲料中检测IgG含量，是因为一种特殊的动物饲料原料，血浆蛋白粉。血浆蛋白粉的生产过程是利用加工手段对新鲜血液进行抗凝处理和分离，将血浆从血液中分离出来，再加工成粉状产品。血浆蛋白粉因其具有丰富的蛋白质，营养全面均衡，消化率高，适口性好，广泛添加在动物饲料中，最重要的是血浆蛋白份含有20-30%免疫球蛋白，能够吸附在动物肠道，从而减少动物腹泻，提高抗病力，被动物吸收后，能增强免疫力，减少抗生素使用。IgG作为血浆蛋白粉中的主要成分，检测其含量也成为了评价饲料质量的重要指标之一。
针对饲料、浓缩饲料、含IgG的饲料原料的IgG含量检测，在2007年颁布的国标《饲料中免疫球蛋白IgG的测定高效液相色谱法》(GB/T 21033-2007) 中，也使用了与上文中提到的《保健食品中免疫球蛋白IgG的测定》相同的方法，即使用HiTrap Protein G HP (29048581) 对IgG进行含量检测。
图3：《饲料中免疫球蛋白IgG的测定高效液相色谱法》及其检测条件
尽管国标已经对于测试方法进行了详尽的阐述，但是还是有几个实验要点需要相关应用的老师们关注。
关于使用Protein G配基亲和层析的液相色谱法测定IgG含量，不只局限于保健食品和饲料，也可用于乳制品等含有IgG成分的产品，不同领域的检测都有相关文献支持，这充分说明这种实验方法是一种特异性较好的分离方法，准确性高，操作简单，具有很强的普适性。如果屏幕前的你正在寻找一种用于测定IgG的实验方法，不妨尝试一下HiTrap Protein G HP层析柱。
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订购信息
货号 | 品名 | 规格 |
29048581 | HiTrap Protein G HP 1×1mL | 1 mL, 1支 |
17040403 | HiTrap Protein G HP 2×1mL | 1 mL, 2支 |
17040401 | HiTrap Protein G HP 5×1mL | 1 mL, 5支 |
17040501 | HiTrap Protein G HP 1×5mL | 5 mL, 1支 |
17040503 | HiTrap Protein G HP 5×5mL | 5 mL, 5支 |
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参考文献：
[1]. GB/T 21033-2007.饲料中免疫球蛋白IgG的测定 高效液相色谱法
[2]. GB5009.194—2003.保健食品中免疫球蛋白IgG的测定
[3].王淼, 薛巧如, 姚敏菲, & 谢正福. (2010). 高效亲和色谱法测定静注人免疫球蛋白igg. 今日药学, 20(4), 3.
