血液作为体外诊断的主要样本来源,血浆或血清的分离是快速检测的第一步。
如何能在不使用离心机的情况下高效分离血细胞而获得高质量的血浆呢?
在全血分离中需要关注哪些问题呢?
↓ 一文快速了解滤血膜全血分离小Tips ↓
Q1
全血分离对POCT检测有什么作用?
去除红细胞造成的背景干扰;
提高检测结果的特异性和灵敏度;
降低或消除对外部样本制备的需求;
减少总测试时间。
Q2
全血样本分离需要考虑哪些问题?
全血分离膜有不同的材料(玻纤、不对称聚砜膜)和多种分离方式(侧向流、垂直流、复合流);
血液样本体积大,可以通过双层叠加血浆分离膜进行样本前处理;
需要注意样本质量、稀释缓冲液成分和处理方式:
样本年龄——样本年龄越大,红细胞越脆弱;
男性供体的血液应在48 h内使用,女性供体的血液应在72 h内使用。储存温度为4 °C;
低渗缓冲液可能会导致红细胞破裂,发生溶血现象干扰实验结果;
施加外部压力以分离血浆的同时可能会导致红细胞因剪切力而破坏。
图1:不同分离方式示意图
Q3
血浆的回收率一般在什么范围内?
理论上可用的血浆量小于全血总量的60%;
垂直流血浆回收率通常为60%~80%;
侧向流和复合流具有更高的回收率。
Q4
血浆回收率低有可能是什么因素导致?
吸收垫、膜或者微流控装置中的毛细吸力提供不足;
血液样本体积太少或者全血分离垫过厚;
缓冲液体积过小;
血样的血细胞比容过高或过低:
典型值 (%) :男性(43-49%)、女性(37-45%)、新生儿(41-56%);
来自高海拔地区的样本可能具有非常高的值。
Q5
玻纤作为滤血膜的特点以及需要考虑的因素有哪些?
通过细胞-纤维相互作用捕获红细胞,适用所有滤血场景;
需要考虑的问题:
分离能力取决于体积;
在过滤前不要将血液与缓冲液混合;
过载会导致红细胞突破;
血液分离可通过:复合流(基于盒式设备)、侧向流(试纸条)、垂直流(垂直渗滤设备)三种方式进行,并可通过双层膜叠加提高全血分离性能。
图2:玻璃微纤维通过捕获红细胞而实现红细胞分离的效果
Q6
不对称聚砜膜作为滤血膜的特点以及需要考虑的因素有哪些?
通过垂直过滤将红细胞与血浆分离,借助孔径大小差异截留红细胞;
需要考虑的问题:
分离能力取决于样本体积,样本量过载可能会导致堵塞现象;
分离仅通过垂直流动发生,在侧向层析中需要增大与结合垫的重叠面积;
分离性能无法通过堆叠多层分离膜来提高全血分离效率;
不对称聚砜膜可以用作玻纤叠加的底层(最终层)。
图3:不对称聚砜通过孔径大小差异截留红细胞(垂直过滤)
Q7
Cytiva可提供哪些滤血膜?