生化反应曲线是整个生化反应过程的记录,其形成基于生化分析仪器的光电比色原理。当一束特定波长的光穿过含有反应混合物的比色杯时,溶液中的物质会吸收部分光能量,使得透过的光强度发生变化。仪器通过检测这种光强度的变化,并将其转换为吸光度值,随着时间的推移,连续记录下这些吸光度值,就形成了生化反应曲线,其纵坐标为吸光度,横坐标为时间或测量周期。
正常情况下,曲线应比较平滑,无明显的跳点;终点法的反应曲线,在反应到达终点或平衡点时,吸光度将不再变化;速率法的反应曲线,吸光度会随时间呈线性变化(两点速率法除外)。如果曲线出现异常,如抖动、斜率异常、吸光度超出范围等,这可能是样本问题(如溶血、黄疸、脂血等)、试剂问题(如试剂过期、污染等)、仪器问题(如光源不稳定、比色杯脏污等)的 “信号灯”,提示我们需要进一步排查原因。
几乎所有反应曲线跳动:
电源接地不良:主电源接地不良、光电盒接地不良,会导致仪器的电气信号受到干扰,从而使反应曲线出现跳动。这种情况下,需要检查电源接地线路,确保接地良好,以消除电气干扰,使仪器恢复稳定运行。
反应盘进水:真空泵压力密封圈磨损、真空泵电源接触不良、管接头处漏气、管路漏气、吸废液钢管堵塞、单向阀坏、比色杯破裂等原因都可能导致反应盘进水。水会影响光路的传输和比色杯的透光性,进而导致反应曲线跳动。此时,应及时检查并修复漏水部位,更换损坏的密封圈、单向阀或比色杯,确保反应盘的干燥和光路的正常。
搅拌杆不搅拌:搅拌电机坏、搅拌电机线接触不良、搅拌杆顶住比色杯底,会使反应体系中的物质混合不均匀,反应进程不一致,从而引起反应曲线跳动。需要维修或更换搅拌电机,调整搅拌杆的位置,保证搅拌正常进行,使反应均匀稳定。
光路歪:灯泡装歪、比色杯装歪、温控锅装歪、透镜装歪等光路问题,会造成光信号的传输不稳定,导致反应曲线出现跳动。应仔细调整光路部件的位置,确保光路笔直且准确,以保证光信号的稳定传输。
试剂加入异常:试剂针堵塞、试剂注射器脱落、试剂针接头处脱落、快速接头脱落,会使试剂加入量不稳定或无法正常加入,影响反应的正常进行,导致反应曲线跳动。要及时清理或更换堵塞的试剂针,固定好试剂注射器和接头,确保试剂能够准确、稳定地加入反应体系。
一次性比色杯不干净:比色杯上的污垢或残留物质会干扰光的吸收和反射,使反应曲线出现异常跳动。使用前应确保比色杯清洁干净,如有必要,可对比色杯进行清洗或更换。
外界干扰因素:如发动机、电钻等设备产生的电磁干扰,会影响仪器的正常运行,使反应曲线出现跳动。应将仪器放置在远离这些干扰源的地方,或者采取屏蔽措施来减少外界干扰。
只有个别波长反应曲线跳动:通常也是由于电源接地不良引起的,检查和解决方法与几乎所有反应曲线跳动时的电源接地不良情况相同。
只有个别项目反应曲线跳动:
试剂异常:试剂变混浊、变色或试剂放错位置,可能会影响该试剂参与的特定项目反应,导致反应曲线跳动。试剂经搅拌后起较多气泡,挡住光路,也会出现这种情况。应检查试剂的状态和位置,确保试剂正确无误且质量合格,对于有气泡的试剂,可适当静置或采取其他消泡措施后再使用。
几乎所有反应曲线形状正确,反应曲线平稳,但基本无反应:
样本未加入:样本针堵塞、样本注射器脱落、样本针接头处脱落、快速接头脱落等原因,会导致样本无法正常加入反应体系,从而使反应无法启动,曲线基本无变化。此时,需要检查并清理样本针,确保样本注射器和接头连接牢固,保证样本能够顺利加入反应体系,使反应正常进行。
个别项目反应曲线形状正确,反应曲线平稳,但基本无反应:
第二试剂未加入:第二试剂放错位置,会使该项目缺少关键的反应试剂,导致反应无法进行,曲线无明显变化。应仔细核对试剂位置,将第二试剂放置到正确的位置,以保证反应的完整性。
个别项目反应曲线形状改变,但反应曲线平稳:
试剂加入异常:试剂盘固定销钉脱落、试剂注射器漏气,会使试剂加入量不准确或不稳定,影响反应的正常进程,导致反应曲线形状改变。要及时修复试剂盘固定销钉,检查并更换漏气的试剂注射器,确保试剂能够准确加入反应体系,使反应曲线恢复正常。
个别项目反应曲线形状改变,剧烈上升或下降,反应曲线或平稳,或小幅波动:
试剂异常:试剂性能差或失效,最易发生在 ALP、GGT、AMY 等项目上。试剂的质量问题会导致反应无法按照预期进行,从而使反应曲线出现异常波动。应及时更换质量合格的试剂,确保试剂的性能稳定可靠,以保证反应的准确性。
个别测试反应曲线形状改变,剧烈上升或下降,但反应曲线平稳:
试剂间交叉污染:最易发生在 TG、TC、Glu 和 Bun 等项目上。当试剂针清洗不彻底或试剂瓶放置不当等情况时,可能会导致试剂间交叉污染,使反应受到干扰,曲线出现异常变化。要加强试剂针的清洗和维护,规范试剂瓶的放置和使用,避免试剂间的交叉污染,保证反应的特异性。
样本异常:样本中含有某些药物或干扰成分,最易发生在 TB、DB 等项目上。这些外来物质可能会与试剂发生异常反应,影响反应曲线的正常形态。遇到这种情况,需要结合患者的用药史和病情,进一步分析样本中可能存在的干扰因素,必要时重新采集样本进行检测,以获得准确的检测结果。
几乎所有项目重复性差:
样本加入异常:样本针半堵塞、样本注射器中有气泡、样本针接头处密封不严、样本针内壁阀关闭不严,会导致每次加入的样本量不一致,从而使检测结果的重复性变差。应仔细检查样本加入系统,清理样本针,排除气泡,确保样本加入的准确性和一致性。
试剂加入异常:试剂针半堵塞、试剂注射器中有气泡、试剂针接头处密封不严、试剂针内壁阀关闭不严,同样会造成试剂加入量的不稳定,影响反应的重复性。要对试剂加入系统进行检查和维护,保证试剂加入的精确性和稳定性。
搅拌异常:搅拌电机坏、搅拌电机线接触不良、搅拌杆顶住比色杯底,会使反应体系混合不均匀,导致各反应杯内的反应进程不一致,结果重复性差。需要及时维修或更换搅拌装置,确保搅拌正常,使反应均匀进行。
试剂 / 样本内外壁清洗不够,交叉污染大:液泵压力下降、第二级过滤器堵塞,会使试剂和样本在反应过程中受到污染,影响检测结果的重复性。应定期检查和维护清洗系统,清理过滤器,保证试剂和样本的纯净度,减少交叉污染的发生。
反应盘温度不稳定:反应盘温度波动较大,会影响酶促反应等的速率和进程,导致结果重复性差。要检查反应盘的温控系统,确保温度稳定在设定范围内,为反应提供一个稳定的环境。
个别项目重复性差:
试剂放错位置:使用了错误的试剂,必然会导致反应结果异常且重复性差。应仔细核对试剂位置,确保使用的试剂正确无误。
试剂异常:试剂性能差或失效,如在 ALP、GGT、AMY 等项目上,试剂的问题会使反应不稳定,结果重复性不佳。及时更换质量合格的试剂,是解决这一问题的关键。
项目参数设置异常:样本量少、反应时间短、反应方法设置错误等参数设置问题,会影响反应的充分程度和准确性,导致结果重复性差。应仔细检查项目参数设置,确保其符合实验要求和试剂说明书的规定,保证反应能够正常进行并获得可靠的结果。
定标异常:定标液浓度设置错误、定标液失效,会使检测结果偏离真实值,且重复性差。要定期对定标液进行检查和更换,确保定标过程准确无误,为检测结果的准确性提供保障。
反应曲线异常表现:ALP 检验标本反应曲线发生异常后,在加入 R2 以后,反应曲线回复正常,起因可能是检验仪器性能不稳定导致;碱性磷酸酶试剂空白反应曲线中的吸光度严重超出正常指标,对其添加试剂 R2 之后反应曲线指标回复正常,原因可能是检验试剂变化引发反应曲线异常。
临床案例分析:曾有一位 76 岁男性患者,因咳嗽咳痰、胸闷气短入院,常规检查中 ALP 单纯性剧烈升高,其他肝功类结果未见明显异常。工作人员查看曲线无异常波动,质控在控,稀释 5 倍后曲线正常,结果乘以稀释倍数后无太大差别,认为数据可靠。考虑到 ALP 试剂线性范围,结合患者之前的前列腺恶性肿瘤、腹膜肿瘤病史,以及此次检查的胸部诸骨密度增高、胸椎密度不均等情况,推测可能是骨转移导致 ALP 升高。最终临床加用唑来磷酸粉针对症治疗,这表明 ALP 升高在该案例中辅助证明了病人恶性肿瘤已经骨转移。
反应曲线异常表现:当标本中丙氨酸转氨酶自身浓度过高时,反应曲线会出现异常,加入 R2 进行稀释后反应曲线恢复平稳水平线。
临床案例分析:在日常检测中,如遇到 ALT 反应曲线异常,可能是由于标本采集、保存不当或患者自身疾病状态导致酶浓度异常升高。例如,在某些肝脏疾病急性发作期,肝细胞大量受损,ALT 释放入血,使血清中 ALT 浓度远超正常范围,从而在检测时出现反应曲线的异常变化。此时,通过对反应曲线的分析,结合患者的临床症状和其他相关检查,能够更准确地判断病情,并采取相应的治疗措施。
反应曲线异常表现:样本中含有某些药物或干扰成分时,最易发生在 TB、DB 等项目上,导致反应曲线形状改变,剧烈上升或下降,但反应曲线平稳。
临床案例分析:某患者在服用了特定药物后进行胆红素检测,发现 TB 和 DB 的反应曲线出现异常。经过进一步调查发现,该药物的代谢产物与胆红素检测试剂发生了反应,干扰了检测结果。在这种情况下,需要结合患者的用药史,对检测结果进行综合分析,必要时采取停药或其他措施后重新检测,以获得准确的胆红素水平,为临床诊断和治疗提供可靠依据。
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