隐球菌属检验及临床意义

学术 2024-10-05 17:31 河南

隐球菌属(Cryptococcus)生物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球菌目、隐球菌属。本属包括17个种和8个变种。其中仅新生隐球菌(Cryptococcus neo formans)及其变种对人具有致病性。新生隐球菌广泛分布于自然界，以鸽粪中最常见，也存在于人体体表、口腔和肠道中。1894年在法国首先发现本菌，我国于1964年首次在南京发现。

生物学特性

新生隐球菌又称溶组织酵母菌，菌体呈圆形或卵圆形，直径一般为4~6μm，菌体外周有一层宽厚的荚膜，荚膜较菌体大1~3倍，折光性强，不易被一般的染料着色而难以发现，故名隐球菌。

常采用墨汁负染色法，可在黑色背景下见到圆形或卵圆形透亮菌体和宽厚荚膜。非致病性隐球菌无荚膜。

本菌以芽生方式繁殖，常呈单芽，偶尔出现多芽，芽颈较细，但不形成假菌丝。在沙保弱或血琼脂培养基上于25℃或 37 ℃下皆生长良好。数天后形成酵母型菌落，初为乳白色细小菌落，增大后表面黏稠、光滑，转变为橘黄色，最后变为棕褐色。

荚膜由多糖构成，根据其抗原性分为A、B、C、D四个血清型。临床分离株多属于A型与D型。

生物学特性

1.检验程序

新生隐球菌的检验程序见图

2.标本采集

根据感染部位的不同，采集不同的标本。对于疑似隐球菌性脑膜炎患者，以腰椎穿刺术无菌采集脑脊液3~5mL，特殊情况下可采用小脑延髓池或脑室穿刺术，标本采集后应立即送检。

3.检验方法

3.1 直接检查

3.1.1染色镜检：将脑脊液离心沉淀物、痰、脓液、淋巴结穿刺液等标本涂片、墨汁负染色、镜检，可见圆形或卵圆形的有折光性的菌体，外周有一圈透明的肥厚荚膜即可确诊。非致病性隐球菌无荚膜。这是诊断隐球菌脑膜炎最简便、快速的方法。常规细胞染色可也发现隐球菌，如用PAS染色后新生隐球菌呈红色。但易误诊和漏诊。

3.1.2抗原检测：用乳胶凝集试验、ELISA和McAb法等免疫学方法检测患者血清中新生隐球菌荚膜多糖特异性抗原，已成为临床诊断的常规方法。其中以乳胶凝集试验最为常用，此法简便、快速，尤其对直接镜检和分离鉴定阴性者更有诊断价值。ELISA法敏感性和特异性都较高。McAb法除有较高敏感性和特异性外，还有标本不需稀释和预先处理的优点。

3.1.3抗体检测：用放射免疫法和试管凝集试验可检测患者血清中新生隐球菌抗体，对诊断虽无意义，但对疾病预后判断有一定价值。

3.1.4核酸检测：核酸检测为诊断隐球菌感染提供了新的有效方法。用DNA探针法、PCR等技术检测痰液、支气管吸出物、脑脊液等标本中新生隐球菌的核酸,具有高度特异性。目前已有商品化试剂盒用于真菌核酸检测。

3.2 分离培养

将标本接种于沙保弱培养基上，病原性隐球菌于25℃或37℃下皆生长良好，而非病原性隐球菌在37℃时不能生长。培养2~5天，病原性隐球菌可形成典型的酵母型菌落，取菌落涂片、墨汁负染色、镜检。

3.3 鉴定试验

3.3.1糖同化及发酵试验：新生隐球菌能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵糖类、不同化硝酸盐。非致病性隐球菌则不能同化肌醇。

3.3.2脲酶试验：新生隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂培养基的尿素形成NH4，和CO2，使培养基PH值升高，培养基由黄色变为粉红色。白假丝酵母菌为阴性。

3.3.3酚氧化酶试验：将菌接种于L-多巴枸橼酸铁和咖啡酸培养基中，培养2~5天，新生隐球菌呈棕黑色菌落。

3.4 药敏试验

对两性霉素B、5-FC、氟康唑、伊曲康唑等药物敏感，临床治疗时常两种药物联合使用。

临床意义

新生隐球菌以外源性感染为主，主要经呼吸道侵入人体而感染。原发感染常发生于肺部，多无症状或仅有流感样症状，通常能自愈。

机体免疫功能低下者，如艾滋病、恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素的患者，新生隐球菌在肺部大量繁殖，引起支气管肺炎，严重者呈暴发型感染并迅速死亡。

部分患者发生血行播散可累及皮肤、黏膜、淋巴结、骨骼、内脏等，最易侵犯的是中枢神经系统，主要引起脑膜的亚急性和慢性感染，死亡率高。新生隐球菌的主要致病物质是荚膜多糖，有抑制吞噬、诱使动物免疫无反应性、降低机体抵抗力的作用。

近年来，隐球菌病发病率越来越高，已成为艾滋病最常见的并发症之一，也是艾滋病死亡的首要原因。在国内隐球菌感染已被列为乙类传染性疾病。

来源：检验学习网

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