免疫测定技术拥有高灵敏度、检测快速简便、适用范围广等诸多优点,但易受样本中干扰物质影响,导致假阳或假阴性结果,严重影响临床诊断。在各种干扰因素中,样品中的各类抗体干扰往往都会造成严重的错误结果且发生几率高,其难以从样品形态上分辨。这些抗体干扰可以分为:抗动物抗体干扰、抗微生物抗体干扰、嗜异性抗体干扰、抗检测试剂组分抗体干扰、自身抗体干扰、抗分析物抗体干扰。
在夹心法的免疫测定中,抗动物抗体会对检测结果产生正向和负向两种干扰(负向干扰很少见)。正向干扰是指出现检测结果异常上升的,其产生是由于抗动物抗体同时识别并桥连了包被抗体(捕获抗体)及标记抗体,造成与出现检测物时相似的正向结果上升。负干扰的产生是由于抗动物抗体与包被抗体(捕获抗体)或者标记抗体结合,阻碍了包被抗体、分析物和标记抗体形成夹心结构。抗动物抗体的产生一般是由于个体的免疫系统接触了外来蛋白抗原(如各类抗体药),在这类抗体干扰中最常见的是人抗鼠抗体即HAMA干扰。人抗动物抗体反应可产生不同种类的抗体,包括IgG、IgA、IgM以及较少见的IgE。这些抗体可以根据其专一性分为抗独特型、抗同种型等类别。通常,抗同种型抗体比抗独特型抗体更为普遍。HAMA血清浓度范围可以从微克每升到克每升不等,并且这些浓度水平在接触小鼠后可能持续数周到数月不等。
抗微生物抗体的表现为,患有败血症的大肠杆菌感染者常表现出限制性的IgM λ异常蛋白,这会导致心肌肌钙蛋白I(cTnI)、促甲状腺激素(TSH)、总人绒毛膜促性腺激素(hCG)、甲胎蛋白(AFP)以及癌胚抗原125(CA-125)等指标在免疫检测结果中出现较高的假阳性率。通过引入无关的小鼠单克隆抗体或利用甲醛处理感染大肠杆菌患者的样本进行孵化,检测结果能够恢复到正常水平。说明IgM λ异常蛋白具有抗免疫球蛋白的活性,导致出现异常增高的错误结果。
嗜异性抗体是指对未知抗原产生的抗体,其特点是通常有多重特异性和较弱的亲和力。一般来说嗜异性抗体较难以实验确认,有人建议将具有以下特征的抗体视为嗜异性抗体:没有使用动物免疫球蛋白或其他已知免疫原进行治疗的历史,并且显示出对两种或多种特异性或天然风湿因子活性。其在夹心法检测中,嗜异性抗体可以桥连包被抗体和标记抗体,但在竞争法中,由于其较低的亲和力,通常干扰效果不明显。
检测试剂中的一些抗体偶联的组分也可以作为干扰抗体的靶位点,比如使用了亲和素-生物素的检测系统,其中的链酶亲和素会被抗链酶亲和素抗体识别,并产生干扰。电化学发光免疫试剂中的钌(Ru)整合标记物也可作为干扰的靶点。使用辣根过氧化物酶为标记物的检测系统所产生的干扰也有被证明了干扰物对过氧化物酶标记物具有特异性。这类型的抗体干扰通常是针对抗体标记物或者是包被的偶联物,由于其仅针对特定的某一靶标,产生的最终干扰结果是阻碍了形成用于检测的免疫复合物的一系列桥连,对夹心法通常造成检测结果降低,对竞争法则会造成检测结果的升高。
自身抗体干扰指的是类风湿因子(RF),是一种针对IgG分子的Fc片段产生的自身抗体。它是一种免疫球蛋白,通常属于IgM型,但也可能是IgG、IgA或IgE型。RF存在于大多数类风湿关节炎和其它相关及不相关疾病的患者血清中。在夹心法中,它对检测系统的干扰是通过与IgG抗体的Fc片段相结合而产生的。RF可通过阻断包被抗体与分析物结合而产生假阴性干扰,或者通过桥连包被抗体和标记抗体从而引起假阳性干扰。
针对目标检测物,人体可能产生出针对性的抗体,造成对其检测的影响。最常见的这类干扰是在甲状腺球蛋白(TG)检测时,样品中的抗甲状腺球蛋白抗体(ATG)会与TG结合对其检测产生干扰,造成TG检测的异常偏低。同样的抗胰岛素抗体可与胰岛素结合从而无法与试剂中的抗体结合,引起胰岛素检测结果假性偏低。这可以通过沉淀法去除干扰抗体来阻止这种干扰的产生。还有诸如此类的抗体有抗肌钙蛋白抗体,抗泌乳素抗体,抗甲状腺素抗体等等。
上述各类干扰抗体中,如果是针对抗体产生的干扰,可以选用合适的阻断剂来降低或者消除干扰;而针对试剂组分产生的干扰,可以选择增大该试剂组分用量来降低干扰水平或更换试剂组分来消除干扰;针对目标检测物的干扰通常需要对样本进行沉淀法处理去除干扰物后检测。以上是针对免疫检测分析中各类抗体干扰的总结。
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