如何扩培光合细菌,菌量高活性好,成本更低?

百科   2024-11-26 00:00   河南  


编辑 | 水产研究社
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摘要为有效提高光合细菌PS3在工厂化生产中的生物量对其主要培养参数进行了系统的研究(所涉及的培养参数包括光源光照度溶解氧培养基PH值、盐度接种浓度等。

结果表明:PS3在厌氧条件下生长较好而其最适接种浓度光照度光源PH及盐度分别为10%、4000lx(钨丝灯)、6.5-7.0、5。

红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)属于细菌门(Bacteroidetes),红螺菌目(Rhodospirillales)的红螺菌科(Rhodospirillaceae)[1]。
该菌是紫色非硫光合菌,革兰氏阴性,属于厌氧光能自养菌,但有些种在无光的微好氧或者好氧条件下能进行氧化代谢。
按NCBI Taxonomy上的分类方法,其又属于α-变形菌门(α-Proteobacteira)。
光合细菌(photosynthetic bacteria, PSB)在水生态系统的物质循环、能量转化和水体净化中起重要作用。
光合细菌尤其是红假单胞菌在水产养殖、污水处理中有多方面的作用,如降解有机质、将水体中氨态氮、硫化氢和其他有害物质吸收而净化水质,通过吸收水体中的耗氧因子而减少水体耗氧,作为培养浮游动物的饵料和饲料添加剂等。

光合细菌( photosynthetic bacteria) 广泛分布于淡水、海水、极地或温泉 (包括高热水体) 以及高盐、高有机质含量等不同的生态环境中,是一类行不产氧光合作用、具有复杂代谢功能的微生物,它能利用多种基质,可营异养、自养或兼性营养;存在着好氧、厌氧和兼性厌氧类型门。

光合细菌在维持自然界的生态平衡、废污水的处理等方面有着重要作用,同时光合细菌作为单细胞生物可以从中获得较丰富的单细胞蛋白,其广泛应用于农牧渔业尤其在水产养殖中的应用更为广泛。

生产更好的优质菌液,促进工厂化生产,为养殖业提供质优价廉的产品,本实验对光合细菌 PS3培养的主要参数进行了较系统的观察和研究,现将实验情况总结如下

1材料与方法

1.1菌株
试验菌株 PS3由中国水产科学研究院南海水产研究所饲料与健康养殖开发中心富集、分离。
1.2实验方法
本实验所采用的培养条件是不同光源和光照度、溶解氧、培养基、PH值、盐度、接种浓度。
验菌株 PS3 培养用 6 L 无色透明聚乙烯塑料瓶,基本培养条件是:厌氧条件下自然光照,将培养基pH、盐度、接种浓度设为 6.5 ~7.0、20、30%,菌量的测定采用 7504 型分光光度计在 660 nm 波长处测定培养物光密度值 (OD),每隔 24 h 取样 1次,连续测 5 d。

1.2.1 光源和光照强度

采用上述方法,在基本培养条件下,将光源和光照强度设为荧光灯 (1500 )、钨丝灯 (600、1500、2700、4000 1x)、自然光 (50000 ~70 000lx),定时取样,测定培养物的 OD 值。

1.2.2 溶解氧

采用上述方法,在基本培养条件下,将溶解氧设为厌氧、通气,定时取样,测培养物的 OD 值。

1.2.3 培养基 pH 值

采用上述方法,在基本培养条件下,将培养基pH 值设为 5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0定时取样,测定培养物的 OD 值。

1.2.4 盐度

采用上述方法,在基本培养条件下,将盐度设为 2、5、10、20、30、40、50、60,定时取样测定培养物的 OD 值。1.2.5 接种量

采用上述方法,在基本培养条件下,将接种量设为 10%、20%、25%、30%,定时取样,测定培养物的 OD 值。

2 结果与分析

2.1 不同光源及光照度对光合细菌 PS3 生长的影响

不同光源及光照度对光合细菌 PS3 生长影响见图 1。

PS3 在不同光源及不同光照度条件下的生长速度为钨丝灯 (4 000 lx) >自然光 (50 000 ~70 000 lx) >钨丝灯 (2 700 lx) >钨丝灯 (1 500lx) >钨丝灯 (600lx ) >荧光灯 (1 500 lx)。

说明该株光合细菌在光照度 600 ~ 70 000Lx范围内都可以生长,但不是光照度越强生长速度就越快,它对光质还有一定的要求。

试验表明用钨丝灯(4 000 x) 生长速度最快,其次是自然光照培养和钨丝灯 (2 700 lx),而荧光灯的效果较差。

在大规模生产中为了节约成本可以选择自然光照培养,在下雨或阴天可以选择钨丝灯 (4 000 1x) 培养。

2.2溶解氧对光合细菌 PS3 生长的影响

有资料报道,氧对光合细菌光合色素合成具有明显的抑制作用,在有氧的条件下叶绿素类胡罗卜素都不产生,从而导致颜色越来越浅。

本试验PS3 在厌氧条件下培养,随着培养时间增长,菌量增多,菌液颜色加深;而在通气培养条件下,培养时间越长,菌量减少,颜色变浅。

本试验结果与徐良梅等报道结果一致。溶解氧对光合细菌 PS3生长的影响见图 2,在厌氧条件下菌株 PS3 生长速度快,经 120 h 培养后 OD 值可达到 2.38;

而通气培养经 120 h 培养后,OD 值降到 0.25,表明该菌株在厌氧条件下培养才能进行正常生长,而在有氧条件下生命活动受到抑制。

2.3 培养基不同 pH 对光合细菌 PS3 生长的影响

培养基不同 pH 对光合细菌 PS3 生长有一定的影响,实验结果表明,培养基 pH 为中性偏酸(6.5 ~7.0) 时菌生长速度最快,菌量最高,培养72 h后 PH 为9.0,OD 值为 2.34,已基本达到最大值; 

pH 在 7.0 以上,经过 120 h 培养后,菌的生物量才达到 2.19 (图 3),这是由于光合细菌的代谢产物为碱性,加快了离子间的化学反应速度,培养基中的有效成分迅速生成沉淀,pH 值升高;

pH 值升高直接影响光合细菌对营养物质的吸收,如果培养基中 pH 值过高就会使原来培养基中的离子间的化学反应平衡发生移动,生成沉淀,降低培养基中的有效成份,影响光合细菌对营养物质的吸收。

也有报道说当光合细菌生长达到高峰期时 pH 值会增高一些,一般达到 9.0 就不会增加,所以在配制培养基时 pH 应为中性或偏酸些 (6.5 ~7.0),这样有利于细菌生长。

2.4盐度对光合细菌 PS3 生长的影响

盐度对光合细菌 PS3 生长的影响见图 4。

该菌株在盐度 2 ~ 60 的培养基中均生长良好,说明该菌株在淡水和海水养殖中均可以使用,应用范围较广。

在 24 ~48 h 内,菌的 OD 值基本随盐度的升高而减小。菌在不同盐度下培养 48 h 后,随着培养时间的延长其生长速度均明显减缓,其中,盐度2、5 和10 的 OD 值在 48 h 基本达到最大值,盐度5 的48 h的 OD 值达到2.5,是各试验组最高。

20~30 盐度培养 120 h 后,菌的 OD 值可达 2.582.6。这说明在低盐度条件下菌的适应期短,生长速度较快;在高盐度的条件下,菌的适应期延长生长速度较慢。

大规模生产考虑生产周期及成本的因素,认为盐度 5 比较适宜。

2.5 接种浓度对光合细菌 PS3 生长的影响

接种浓度对光合细菌 PS3 生长的影响见图 5,从图中可以看出,10%、20%、25%、30% 4 个不同接种浓度对菌生长均有一定的影响,接种浓度越大,达到最大细菌生物量的时间越短,30% 的接种浓度在 48 h OD 值可达 2.43,已基本达到最大值,而 10% 的接种浓度在 48 h OD 值仅为 1.28,在 72h 增长至 2.27,需培养 120 h 才达到 2.4。

从图中可以看出,72 h 后不同接种浓度组的 OD 值基本接近,表明接种浓度对最终的细菌生物量影响不大。

接种浓度大虽然生长周期短但成本高,接种浓度小虽然生长周期延长些但成本低,大规模生产中从降低生产成本方面考虑,认为 10% 接种浓度较为适宜。

3 小结

本研究结果表明,在工厂化生产中光合细菌PS3 于厌氧条件生长较为良好,其最适接种浓度光照度4000lx(钨丝灯)、pH值 6.5-7.0、盐度为5。


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